木香烃内酯对氧糖剥夺再灌注致小鼠脑片及PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

来源 :宁夏医科大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:adfazzzzzzzzzzzzz
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:研究木香烃内酯(Costunolide,CT)对氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)致小鼠脑片和PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法:(1)建立小鼠脑片OGD/R损伤模型,实验分为六组,分别为Control组,OGD/R组,OGD/R+Nim10μM组,OGD/R+CT1μM组,OGD/R+CT5μM组和OGD/R+CT10μM组。采用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放实验和脑片2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色实验评价脑片的活性和损伤程度,采用Western blot法检测细胞凋亡线粒体途径相关蛋白Bcl-2、Bax、Cyto-c、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3的表达水平。(2)建立PC12细胞OGD/R损伤模型,实验分为Control组,OGD/R组,OGD/R+Nim5μM组,OGD/R+CT2.5μM组,OGD/R+CT5μM组和OGD/R+CT10μM组。采用光镜观察PC12细胞形态学变化;CCK-8法检测细胞存活率;采用LDH试剂盒检测细胞培养液中LDH的活力;Annexin V-FITC/Propidium Iodide双染流式细胞术检测PC12细胞的凋亡率;JC-1染色检测PC12细胞线粒体膜电位变化;Fluo-3/AM荧光染色法检测PC12细胞中钙离子水平;利用Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyto-c、Apaf-1、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3蛋白的表达水平;采用细胞免疫荧光法检测Bcl-2、Bax、Cyto-c和Caspase-3蛋白的表达水平。结果:(1)在小鼠脑片实验中,TTC染色实验结果显示,与Control组比较,OGD/R组脑片TTC染色A490处的OD490值明显降低(p<0.05),木香烃内酯1μM、5μM、10μM三个剂量组脑片TTC染色A490处的OD490值明显升高(p<0.05);LDH释放量实验结果显示,与Control组比较,OGD/R组LDH释放量明显升高(p<0.05),与OGD/R组比较,木香烃内酯1μM、5μM、10μM三个剂量组脑片孵育液中LDH的释放量明显减少(p<0.05);Western blot检测结果显示,与Control组比较,OGD/R组Bax、Cyto-c、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3蛋白的表达均有明显升高,而Bcl-2蛋白的表达量均有明显降低,与OGD/R组比较,木香烃内酯1μM、5μM、10μM组Bax、Cyto-c、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3蛋白的表达均明显降低,而Bcl-2蛋白的表达量均有明显升高。(2)在PC12细胞实验中,木香烃内酯对PC12细胞形态的影响结果显示,OGD/R组细胞胞体肿胀,细胞活性降低,部分细胞变圆或呈现漂浮状态;与OGD/R组相比,木香烃内酯2.5μM、5μM、10μM组细胞的胞体比较饱满,胞膜比较光滑完整,贴壁良好,大部分交织成网状结构;CCK-8法检测结果显示,与OGD/R组相比,木香烃内酯2.5μM组和木香烃内酯5μM组细胞存活率明显升高(p<0.05),LDH活力实验结果显示与OGD/R组相比,木香烃内酯2.5μM、5μM、10μM三个剂量组PC12细胞培养液中LDH的活力明显降低(p<0.05);流式细胞术对PC12细胞凋亡率的检测结果显示与OGD/R组相比,木香烃内酯2.5μM、5μM、10μM组细胞凋亡率均有一定程度的降低,JC-1染色检测线粒体膜电位的结果显示,OGD/R组细胞红色荧光减弱,呈现出高绿低红,与OGD/R组相比,木香烃内酯5μM组红色荧光明显增强(p<0.05),而木香烃内酯2.5μM、10μM组红色荧光增强不明显;木香烃内酯对OGD/R损伤后PC12细胞内Ca2+浓度变化的影响结果显示,OGD/R组细胞绿色荧光很强,而木香烃内酯2.5μM,5μM,10μM三个剂量组绿色荧光减弱;Western Blot检测结果显示,OGD/R组Bcl-2的表达降低,而Bax、Cyto-c、Apaf-1、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3的表达升高,与OGD/R组相比,木香烃内酯组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2表达量升高,使促凋亡蛋白Bax表达量下降,使Cyto-c和Apaf-1蛋白的表达下降,使Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3蛋白的表达下降;细胞免疫荧光法对Bcl-2、Bax、Cyto-c和Caspase-3蛋白的表达水平的检测结果显示,木香烃内酯能够使Bcl-2蛋白的表达水平升高,使Bax、Cyto-c和Caspase-3蛋白的表达水平下降。结论:木香烃内酯对小鼠脑片和PC12细胞OGD/R损伤具有一定的保护作用,其保护作用机制可能与调控线粒体-Cyto-c通路,使Bcl-2蛋白的表达量升高,使Bax、Cyto-c、Apaf-1、Caspase-9、Caspase-7、Caspase-3蛋白的表达量降低有关。
其他文献
遥感和地理信息系统技术的结合,对于了解城市空间格局现状,研究城市扩展趋势具有显而易见的好处。本文以多时相遥感影像及其分类结果为原始数据,应用GIS提供的空间分析功能,
目的建立柱前衍生化HPLC法测定复方布洛芬缓释胶囊中精氨酸的含量。方法采用Waters Symmetry-C18(4.6 mm&#215;250 mm,5μm)色谱柱,以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.0 g,加水1 000
志愿服务是指任何人自愿贡献个人时间和精力,在不为物质报酬的前提下,为推动人类发展、社会进步和社会福利事业而提供的服务,中国志愿服务经过几十年的发展,取得了显著的成就
本文以实现超声气体温度的快速、准确测量为目的,在对国内外瞬态气体温度测量研究现状进行深入研究的基础上,提出了应用超声波进行燃烧气体温度测量的方案。 首先应用空气动
目的:为探讨克罗恩病和溃疡性结肠炎的鉴别诊断,收集了18例克罗恩病和29例溃疡性结肠炎,回顾分析两者的临床、内镜及病理特点。结果:血便溃疡性结肠炎明显多见(P<0.01),消瘦
<正>2018年是贯彻落实党的十九大精神的开局之年,是决胜全面建成小康社会、实施十三五规划承上启下的关键一年,也是江苏铁塔开启转型与市场化新征程、深化"一体两翼"战略落地
以中海沥青股份有限公司生产的加氢改质石脑油为原料,评价了两种加氢催化剂的脱芳烃(脱芳)性能,并考察反应温度、反应压力以及氢油体积比对石脑油加氢脱苯反应的影响。结果表
本文研究复杂网络上的经济与社会系统。我们认为许多系统包括自然与人类社会系统都可以建立不同规模与不同拓扑结构的网络模型。在这些模型中,当我们研究系统的特性时候,其网
搅拌装置是化学工业中最常见、最重要的单元操作之一。由于搅拌槽中流体混合机理的复杂性,一直缺乏可靠的放大设计方法,使得操作偏离优化设计,降低混合、传热和传质效率,因此对搅
企业文化作为意识形态的一个概念,在企业管理的工作中则是经济发展的环境要素,或推动或阻碍企业的发展。本文从认识文化入手,阐述了文化和企业文化的一般概念,随后结合TR设计