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目的:研究木香烃内酯(Costunolide,CT)对氧糖剥夺再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)致小鼠脑片和PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法:(1)建立小鼠脑片OGD/R损伤模型,实验分为六组,分别为Control组,OGD/R组,OGD/R+Nim10μM组,OGD/R+CT1μM组,OGD/R+CT5μM组和OGD/R+CT10μM组。采用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放实验和脑片2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色实验评价脑片的活性和损伤程度,采用Western blot法检测细胞凋亡线粒体途径相关蛋白Bcl-2、Bax、Cyto-c、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3的表达水平。(2)建立PC12细胞OGD/R损伤模型,实验分为Control组,OGD/R组,OGD/R+Nim5μM组,OGD/R+CT2.5μM组,OGD/R+CT5μM组和OGD/R+CT10μM组。采用光镜观察PC12细胞形态学变化;CCK-8法检测细胞存活率;采用LDH试剂盒检测细胞培养液中LDH的活力;Annexin V-FITC/Propidium Iodide双染流式细胞术检测PC12细胞的凋亡率;JC-1染色检测PC12细胞线粒体膜电位变化;Fluo-3/AM荧光染色法检测PC12细胞中钙离子水平;利用Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyto-c、Apaf-1、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3蛋白的表达水平;采用细胞免疫荧光法检测Bcl-2、Bax、Cyto-c和Caspase-3蛋白的表达水平。结果:(1)在小鼠脑片实验中,TTC染色实验结果显示,与Control组比较,OGD/R组脑片TTC染色A490处的OD490值明显降低(p<0.05),木香烃内酯1μM、5μM、10μM三个剂量组脑片TTC染色A490处的OD490值明显升高(p<0.05);LDH释放量实验结果显示,与Control组比较,OGD/R组LDH释放量明显升高(p<0.05),与OGD/R组比较,木香烃内酯1μM、5μM、10μM三个剂量组脑片孵育液中LDH的释放量明显减少(p<0.05);Western blot检测结果显示,与Control组比较,OGD/R组Bax、Cyto-c、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3蛋白的表达均有明显升高,而Bcl-2蛋白的表达量均有明显降低,与OGD/R组比较,木香烃内酯1μM、5μM、10μM组Bax、Cyto-c、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3蛋白的表达均明显降低,而Bcl-2蛋白的表达量均有明显升高。(2)在PC12细胞实验中,木香烃内酯对PC12细胞形态的影响结果显示,OGD/R组细胞胞体肿胀,细胞活性降低,部分细胞变圆或呈现漂浮状态;与OGD/R组相比,木香烃内酯2.5μM、5μM、10μM组细胞的胞体比较饱满,胞膜比较光滑完整,贴壁良好,大部分交织成网状结构;CCK-8法检测结果显示,与OGD/R组相比,木香烃内酯2.5μM组和木香烃内酯5μM组细胞存活率明显升高(p<0.05),LDH活力实验结果显示与OGD/R组相比,木香烃内酯2.5μM、5μM、10μM三个剂量组PC12细胞培养液中LDH的活力明显降低(p<0.05);流式细胞术对PC12细胞凋亡率的检测结果显示与OGD/R组相比,木香烃内酯2.5μM、5μM、10μM组细胞凋亡率均有一定程度的降低,JC-1染色检测线粒体膜电位的结果显示,OGD/R组细胞红色荧光减弱,呈现出高绿低红,与OGD/R组相比,木香烃内酯5μM组红色荧光明显增强(p<0.05),而木香烃内酯2.5μM、10μM组红色荧光增强不明显;木香烃内酯对OGD/R损伤后PC12细胞内Ca2+浓度变化的影响结果显示,OGD/R组细胞绿色荧光很强,而木香烃内酯2.5μM,5μM,10μM三个剂量组绿色荧光减弱;Western Blot检测结果显示,OGD/R组Bcl-2的表达降低,而Bax、Cyto-c、Apaf-1、Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3的表达升高,与OGD/R组相比,木香烃内酯组能够使抗凋亡蛋白Bcl-2表达量升高,使促凋亡蛋白Bax表达量下降,使Cyto-c和Apaf-1蛋白的表达下降,使Caspase-9、Caspase-7和Caspase-3蛋白的表达下降;细胞免疫荧光法对Bcl-2、Bax、Cyto-c和Caspase-3蛋白的表达水平的检测结果显示,木香烃内酯能够使Bcl-2蛋白的表达水平升高,使Bax、Cyto-c和Caspase-3蛋白的表达水平下降。结论:木香烃内酯对小鼠脑片和PC12细胞OGD/R损伤具有一定的保护作用,其保护作用机制可能与调控线粒体-Cyto-c通路,使Bcl-2蛋白的表达量升高,使Bax、Cyto-c、Apaf-1、Caspase-9、Caspase-7、Caspase-3蛋白的表达量降低有关。