NF-κB信号通路在亚砷酸钠致人胚肺成纤维细胞损伤中作用机制的研究

来源 :内蒙古科技大学包头医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wajohn
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目的探讨核因子κB(NF-κB)信号通路在亚砷酸钠染毒致人胚肺成纤维细胞(HELF)损伤中的作用机制。方法将HELF细胞分别暴露于0、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40mmol/L亚砷酸钠溶液染毒18、24、48h,采用MTT法检测细胞存活率;倒置显微镜观察染毒24h后HELF细胞形态学变化;除40mmol/L浓度组外,采用ELISA法检测染毒24h后HELF细胞上清液中TNF-a、IL-6、IL-1β炎性因子的浓度。将HELF细胞分为2组,一组为亚砷酸钠染毒组,另一组为PDTC(Pyrrolidine dithiocarboxylic acid ammonium salt,PDTC)干预组),亚砷酸钠组分别暴露于0、2.5、5、10、20mmol/L的亚砷酸钠溶液,PDTC干预组加入以上浓度的亚砷酸钠溶液同时加入10mmol/L的PDTC溶液,染毒24h后,采用Western blot法检测细胞p-p65、p-IKKβ和LC3II/I蛋白的表达水平,采用免疫荧光法观察LC3蛋白的荧光强度。结果(1)随着染毒浓度的升高,HELF细胞逐渐由梭形变圆。(2)与对照组比较,2.5、5、10、20、40mmol/L亚砷酸钠染毒HELF细胞18、24、48h后的细胞存活率均下降,除2.5mmol/L浓度组染毒48 h外,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高和染毒时间的延长,HELF细胞的存活率均呈下降趋势(P<0.01)。(3)与对照组比较,1.25、2.5、5、10、20mmol/L浓度组TNF-a的浓度均升高,5、10、20mmol/L浓度组IL-6的浓度均升高,各浓度组中IL-1β的浓度均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HELF细胞上清液中TNF-a、IL-6、IL-1β的浓度均呈上升趋势。(4)与对照组和相同浓度PDTC干预组比较,2.5、5、10、20mmol/L亚砷酸钠染毒组HELF细胞的p-p65、p-IKKβ和LC3II/I蛋白表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)与对照组和相同浓度PDTC干预组比较,2.5、5、10、20mmol/L亚砷酸钠染毒组HELF细胞的LC3蛋白荧光强度增强。结论亚砷酸钠可造成人胚肺成纤维细胞损伤,促使炎性因子增加,引起细胞自噬并激活NF-κB信号通路,NF-κB信号通路被抑制,自噬相关蛋白表达水平减少,提示NF-κB通路与细胞自噬存在正相关。
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