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大肠杆菌（Escherichia coli）是人类和动物肠道中重要的菌群,同时又是条件致病菌。随着大量抗生素在医疗和畜牧养殖业中的使用,出现越来越多具有抗药性、致病性的人畜共患大肠杆菌,其携带能够水平传播的抗药性基因元件,凸显了公共卫生的意义。实验主要以山东省潍坊和聊城动物源大肠杆菌抗药性的调查为基础,筛选出多抗高抗大肠杆菌,对其进行MLST分型、抗药基因以及毒力基因等分析,探讨多抗高抗菌株间生物学特性的关联;探索应对多抗高抗致病性菌株的策略,针对此类具有潜在公共卫生风险的菌株进行不同种类抗生素联合药敏试验,挖掘联合用药的潜力,以求最大限度地利用现有抗生素,应对高危人畜共患大肠杆菌的传播和蔓延。1.山东省潍坊和聊城动物源致病性大肠杆菌抗药性调查从山东省潍坊和聊城重点养殖企业采集鸡源和猪源动物的肝和肺以及肛拭子样品120份,共分离得到大肠杆菌110株,其中猪源21株,鸡源89株。采用琼脂稀释法对分离鉴定的大肠杆菌进行不同种类药物敏感性试验,包括氨苄西林、头孢噻呋、头孢曲松、头孢噻肟、庆大霉素、恩诺沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、多西环素和氟苯尼考十种药物。根据EUCAST标准,判定所测大肠杆菌对多类抗生素具有抗药性,其中对氟苯尼考和氨苄西林的抗药率高达90%以上,对环丙沙星抗药率最低,也达到68.18%。结果表明存在严重的多重抗药现象,6重及6重以上的抗药菌株共有103株,所占比例为93.64%,其中10重抗药所占的比例最大,达到37.27%,其次是7重抗药占21.83%。不仅如此,所测菌株抗药程度很高,超过50%的菌株对某些药物的最低抑菌浓度（Minimum inhibitory concentration,MIC）高达甚至超过512μg/mL。结果表明,动物源致病性大肠杆菌抗药性非常严重,对公共卫生存在巨大威胁。2.多抗高抗菌株的分子特性对多抗高抗大肠杆菌进行MLST分型,发现32株菌株共有20种谱型,极为分散,未发现普遍的流行性菌株。ST69型为优势谱型,但也仅有5株。大肠杆菌菌株的分子谱型特点大大增加了其防控难度。检测多抗高抗大肠杆菌携带各类常用抗生素抗药基因的情况,发现针对常用抗生素种类均存在携带率高的抗药性基因。β-内酰胺类抗药基因blaCTX和blaTEM检出率高达90%以上;氨基糖苷类的抗生素中抗药基因aadA1和strA-strB携带率70%以上,aadA2、aadB、aacC2、aac（3’）-IV、strA-strB、aph（3’）-Ia和aph（3’）-IIa的携带率也均在60%以上;喹诺酮类的抗生素抗药基因oqxA、oqxB携带率分别为84.38%和96.88%,氟苯尼考抗药基因floR基因携带率高达81.25%。经检测大多数菌株携带抗药基因数量均在10个以上,占62.63%,其中最多携带13个抗药基因,最少携带6个抗药基因。检测多抗高抗大肠杆菌携带毒力基因情况,主要有fimC、hlyF、sitA、iucD、iss、cva/cvi、eaeA、papC、stx2和vat毒力基因,其中毒力基因fimC检出率最高,不同毒力基因的菌株数比例不同,不同菌株含有毒力基因的数量也不同。多抗高抗菌株多数含有1-6个毒力基因,占所有菌株数的90%以上。综上结果说明:多抗高抗致病性大肠杆菌菌株MLST型分散,多种抗药性基因和多种毒力基因普遍共存于临床大肠杆菌中。虽然抗药性和毒力这两个重要生物学特性的进化源于不同的驱动力,但这两种特性在菌株DNA水平上的融合,给公共卫生带来极大的潜在威胁。3.多抗高抗菌株的应对策略针对多抗高抗性菌株,采用棋盘稀释法进行联合用药试验,分析理论上相加、协同的药物体外抗菌效果,发现以下六个具有应用潜力的组合:恩诺沙星与头孢噻呋联合使用,其中9.38%表现出协同作用,21.88%表现出相加作用;恩诺沙星与头孢噻肟联合使用,协同作用占18.88%,相加作用34.38%;恩诺沙星与头孢曲松联合使用,协同作用50%,相加作用37.5%;恩诺沙星与氨苄西林联合使用,协同作用18.75%;氟苯尼考和多西环素的联合使用,协同作用12.5%,相加作用62.5%;效果尤为突出的是庆大霉素和头孢曲松联合,96.88%以上抗药大肠杆菌的体外抗菌活性增强,该组合能大幅降低多重抗药大肠杆菌的MIC,联合使用2μg/m L头孢曲松,庆大霉素的MIC普遍下降4-256倍,针对特定菌株甚至更高。此结果提示,针对某些特定病原菌,精准联合使用抗生素具有应用潜力和价值。本研究结果为防止多抗高抗大肠杆菌的传播和延缓大肠杆菌抗药性产生奠定了基础。