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胃癌是全世界男性死亡的第三大原因,也是女性死亡的第五大原因。虽然根治性手术切除是目前最有效的治疗,但40-70%的患者一经诊断即为晚期。此外,手术后40-60%的患者出现复发。进展期胃癌患者五年生存率仅为5-20%,中位生存期小于1年。含铂方案化疗是晚期胃癌的一线治疗方案,但由于原发性和继发性耐药,有效率仅有29-48%。因此,迫切需要寻找更好的治疗策略。研究表明,microRNAs(miRNAs)与肿瘤的形成、生长、转移,可作为肿瘤抑制基因或癌基因。miRNAs在不同肿瘤的耐药中扮演着重要的角色。作为生物标志物,可用于癌症的诊断和预测治疗效果和预后。Mi RNA-200c(miR-200c)是miR-200家族的成员,其基因定位于人类12号染色体(12p13.31)。此前,发现miR-200c对胃癌细胞SGC7901/DDP逆转耐药及抑制增殖作用与诱导钙粘附蛋白E、磷酸酶基因蛋白和Bax蛋白的表达、抑制Akt信号通路的激活和抑制B淋巴细胞瘤-2基因蛋白的表达有关。此外,miRNAs还与DNA修复相关机制相关。最近的一项研究表明,miR-192的可以靶向抑制肝癌HepG2.2.15细胞核苷酸切除修复(Nucleotide excision repair,NER)途径中核苷酸切除修复交叉互补基因(excision repaircross-complementing gene,ERCC)3蛋白和ERCC4蛋白。故mi R-200c在胃癌耐药细胞株的异常表达,其是否通过NER途径的ERCC3和ERCC4发挥作用尚未可知。本研究拟在前期研究和文献报告的基础上,进一步观察mi R-200c是否通过NER途径的ERCC3和ERCC4发挥作用,并进一步研究miR-200c的表达和治疗Ⅳ期胃癌患者接受一线含铂化疗方案治疗疗效和预后的相关性,从而指导临床治疗晚期胃癌患者。本研究包含三个部分。第一部分MicroRNA-200c逆转胃癌细胞顺铂耐药机制目的:探讨MicroRNA-200c(miR-200c)在胃癌细胞株SGC7901/DDP耐药逆转的分子机制,特别是与NER途径中两个重要蛋白ERCC3和ERCC4调控关系。方法:通过慢病毒载体转染来研究对SGC7901/DDP、SGC7901细胞株miR-200c和ERCC3、ERCC4表达水平的影响。分别用qRT-PCR和Western blot方法检测细胞株转染前后miR-200c和ERCC3、ERCC4的表达变化;MTT法对各细胞株进行顺铂耐药的评估。结果:与亲本SGC7901细胞相比,顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP的miR-200c在转染前的表达水平较低,而ERCC3和ERCC4蛋白表达均升高,且差异有统计学意义(P均<0.05)。慢病毒载体可调节细胞株miR-200c的表达水平。在慢病毒上调miR-200c的SGC7901/DDP细胞株,对比亲本SGC7901/DDP细胞株和慢病毒空载SGC7901/DDP细胞株,ERCC3、ERCC4蛋白表达下降,顺铂耐药性降低,差异有统计学意义(P均<0.001)。在慢病毒下调mi R-200c的SGC7901细胞株,与亲本SGC7901细胞株和慢病毒空载的SGC7901细胞相比,ERCC3、ERCC4蛋白表达与顺铂耐药性均升高,且差异均有统计学意义(P均<0.001)。结论:过表达miR-200c能通过下调ERCC3和ERCC4逆转SGC7901/DDP细胞株的顺铂耐药,提示机制涉及到核苷酸切除修复途径。第二部分Ⅳ期胃癌患者肿瘤组织中MicroRNA-200c表达水平与含铂方案化疗疗效、预后相关性研究目的:观察Ⅳ期胃癌患者肿瘤组织中的miR-200c表达水平与含铂方案化疗疗效及预后的相关性。方法:肿瘤组织标本及癌旁组织取自51例接受含铂方案化疗的Ⅳ期胃癌患者。用qRT-PCR方法对这些标本进行miR-200c的表达的测定。同时对miR-200c表达水平与患者疗效和预后进行相关性分析。结果:miR-200c在胃癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.05)。发现miR-200c的表达与患者的临床特征无显著相关性。miR-200c高表达的患者有较好的化疗疗效和更长的无进展生存期、总生存期。受试者工作曲线的分析表明,胃癌组织中的miR-200c表达水平可以预测患者含铂方案化疗疗效。多因素分析显示,胃癌组织中miR-200c的高表达的患者有更长的无进展生存期、总生存期。结论:Ⅳ期胃癌患者癌组织中miR-200c的高表达与更好的含铂方案化疗效果和预后相关,提示胃癌组织中miR-200c的水平可能对预测Ⅳ期胃癌患者含铂化疗疗效及预后有意义。第三部分Ⅳ期胃癌患者血浆中MicroRNA-200c表达水平与含铂方案化疗疗效、预后相关性研究目的:观察Ⅳ期胃癌患者血浆中的miR-200c表达水平与含铂方案化疗疗效及预后的相关性。探讨Ⅳ期胃癌患者肿瘤组织与血浆中miR-200c的表达之间有无关联性。方法:血浆取自51例接受含铂方案化疗的Ⅳ期胃癌患者及胃镜证实慢性浅表性胃炎患者。用qRT-PCR方法对这些标本进行miR-200c的表达的测定。同时对miR-200c表达水平与患者疗效和预后进行相关性分析。采用Pearson相关分析51例胃癌患者肿瘤组织与血浆中miR-200c表达相关性。结果:血浆mi R-200c在胃癌患者的表达明显低于慢性浅表性胃炎患者(P<0.05)。发现miR-200c的表达与患者的临床特征无显著相关性。miR-200c高表达的患者有较好的治疗效果和更长的无进展生存期、总生存期。受试者工作曲线的分析表明,血浆中的miR-200c表达水平可以预测患者治疗效果。多因素分析显示,血浆中miR-200c的高表达的患者有更长的无进展生存期、总生存期。胃癌患者肿瘤组织与血浆中miR-200c的表达具有正相关性,(r==0.873,P<0.05)。结论:Ⅳ期胃癌患者血浆中miR-200c的高表达与更好的含铂方案化疗效果及预后相关,提示血浆miR-200c的水平可能预测Ⅳ期胃癌患者化疗疗效及预后。Ⅳ期胃癌患者肿瘤组织与血浆中miR-200c的表达具有正相关性,通过检测血浆中miR-200c的表达在一定程度上可间接反映肿瘤组织中的表达情况。