一株降解聚己内酯的真菌的选育及其解聚酶的研究

来源 :东北师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:hey_yuan
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聚己内酯(polycaprolactone, PCL)是一种半晶质脂肪族合成聚酯,由于其有很多优良的性能,成为目前研究热点,并且已在多个领域中应用。本文从活性污泥中筛选出一株可高效降解PCL的真菌菌株DSWJ1201,应用形态学和分子生物学方法,对该菌株进行菌种鉴定,通过单因素实验和正交试验研究不同发酵条件对菌株产PCL解聚酶的影响,从而对该菌株产酶条件进行优化,并初步研究了该酶的酶学性质,得到了如下实验结果:(1)降解PCL真菌菌株的筛选与鉴定。应用以PCL为唯一碳源的选择性培养基从活性污泥中筛选出了一株具有降解PCL能力的真菌菌株,通过观察菌株和菌落的形态学及ITS序列分析,构建系统发育树,鉴定菌株DSWJ1201为半知菌亚门Deuteromycotina,丝孢真菌纲Hyphomycetes,丝孢菌目Hyphomycetales,丛梗孢科Moniliaceae,青霉属Penicillium的短密青霉Penicillium brevicompactum(2)菌株DSWJ1201的生长温度的测定。该菌株最适生长温度为20℃,在4℃的温度下能够生长繁殖,最高生长温度为30℃,属耐冷菌。(3)对菌株DSWJ1201的产酶条件进行优化。其单因素产酶条件为:碳含量为0.1%(w/v),装液量为75mL/250mL,培养基初始pH为5,发酵温度为20℃,诱导物吐温80为0.5%(v/v)。设计了一个五因素四水平的正交实验,进一步优化了菌株的产酶条件,得到了菌株DSWJ1201的最适产酶条件,培养温度为20℃,培养基初始pH值为7.0,装液量为100mL/250mL,培养基初始碳含量为0.06g/100mL,吐温80含量(V/V)为0.25%。(4)对PCL解聚酶粗酶的酶学性质进行表征。粗酶液的最适反应温度为40℃,4-50℃条件下稳定性较好,最适反应pH为7,pH值5-9的范围内均具有很高的稳定性。(5)菌株DSWJ1201发酵粗酶液对PCL降解后所得产物进行质谱分析,检测出单体、二聚体、三聚体和四聚体。粗酶液对PCL分子的降解反应作用于该共聚物的酯键。
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