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WHO将大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌并列为四大食源性致病菌。食源性疾病在食品安全问题中至关重要,会引发肠道传染病、食物中毒、人畜共患传染病等。现有食源性病原微生物检测技术或因步骤繁琐、费事费力、报告时间长(如传统培养鉴定法)、或因设备和专业技术人员依赖程度强、成本高而不适合动物性食品生产一线和市场的快速便捷检测之用。低成本的多联便捷试纸技术是实现生产一线大样本初筛、质控之用的快检技术的途径之一。但需要解决的关键问题之一是完成多种(两种和/或三种)食源性病原菌的共培养问题。本研究针对大肠杆菌、沙门氏菌和/或单增李斯特菌进行共培养条件优化研究,筛选上述两种和/或三种菌的最佳共培养条件,籍此进行食源菌纸基微流控多联检测装置(Microfluidic Paper Based Analytical Devices,μPADs)的制备,为食源菌便捷检测新技术研发奠定基础。主要研究内容为:1.沙门氏菌、大肠杆菌和单增李斯特菌共培养基(a Multipathogen Selective Enrichment Broth for Simultaneous Growth of Salmonella enterica,Escherichia coli O157:H7,and Listeria monocytogenes,SEL)的优化改良及其μPADs装配:采用Hyochin及Arun研发的“SEL”共培养基对沙门氏菌,大肠杆菌O157:H7及单增李斯特菌的复合培养基(SEL)验证,筛选最佳培养时间,确定改良工艺,装配二联和/或三联μPAD。结果:SEL能够实现沙门氏菌和大肠杆菌两种菌的共培养,且在共培养8 h左右,两种菌的生长曲线较为接近。未改良的SEL培养基培养出的目标菌除大肠杆菌能够正常显色外,无论是单培养或共培养沙门氏菌都显色不稳定或极少显色。筛查出吖啶黄是影响沙门氏菌显色的原因,经改良除去吖啶黄,改良后SEL培养基培养的大肠杆菌和沙门氏菌实现共培养和共显色。2.大肠杆菌和肠炎沙门氏菌二联快速检测试纸(E.coli+S.en-μPADs)的最适制备条件筛选试验:利用筛选出的大肠杆菌和肠炎沙门氏菌最佳共培养条件,制备E.coli+S.en-μPADs,采用响应面法筛选其最适制备条件。最佳显色条件为:大肠杆菌+肠炎沙门氏菌共培养时间8 h、底物滴加量为5μL、菌液滴加量为90μL、反应温度为37℃、反应时间为1.5 h、增菌p H值为7.5。3.E.coli+S.en–μPADs的检测性能测定:将上述制备好的E.coli+S.en–μPADs用于动物性食品样品的检测,并与国标法进行平行对比试验,验证其检测效果。与国标法比较,检测效果为:市场肉类检测出大肠杆菌的符合率为100%,沙门菌的符合率为90.0%,总符合率为95.0%。结论:本研究解决了大肠杆菌和沙门氏菌共培养和共显色技术,依此制备并配套酶底物法大肠杆菌和沙门氏菌二联检测试纸(E.coli+S.en-μPADs),初步实现从增菌培养到报告结果只需10 h时间,达到国标法的准确性,且较国标法节省时间,方便快捷成本低。本研究为大肠杆菌和沙门氏菌便捷检测技术的研发应用提供技术支撑。