拟南芥Sep15-like基因耐逆功能及其作用机制

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作物在生长过程中受到非生物逆境的胁迫通常会导致细胞内氧化还原系统的失衡和内质网压力增大,从而影响了作物的生长和发育。因此鉴定抗逆相关基因及解析其作用机制并应用于育种工作,是提高作物产量的一个重要途径。在动物中,Sep15参与多种氧化还原反应、蛋白质折叠的质量控制等,但在植物中其同源基因的功能未见报道。通过测序公共数据库搜索得到了拟南芥、短柄草和小麦的Sep15-like的cDNA和gDNA序列,设计了特异性引物,克隆得到了全长Sep15-like基因序列。序列分析发现Sep15-like在不同植物中比较保守且具有高度相似的两个结构域:富含半胱氨酸的结构域和硫氧还蛋白样折叠结构域;亚细胞定位实验显示植物Sep15-like蛋白定位于内质网中;组织表达模式分析显示,植物Sep15-like在根和叶中的表达量相对较高;盐、旱胁迫下的诱导表达模式分析表明,植物Sep15-like在盐、旱胁迫下其表达水平明显上调。将AtSep15-like、BdSep15-like和TaSep15-like转入拟南芥中,并获得过表达株系。在萌发阶段,正常条件下,除突变体萌发略差外,野生型和过表达系的萌发情况基本一致,胁迫处理条件下,突变体萌发情况最差,过表达系好于野生型;在幼苗阶段,正常条件下,突变体生长受到抑制,而野生型和过表达系的生长状况基本一致,胁迫处理条件下,突变体的根长明显短于野生型,而过表达系相比于野生型根长增加显著,地上部分差异也比较显著。同样地,BdSep15-like和TaSep15-like转拟南芥过表达系也展现了类似的表型。通过对内质网压力相关Marker基因的测定和蛋白质羰基、巯基含量的测定,初步证明AtSep15-like基因在胁迫条件下可以有效缓解内质网压力。通过对ROS含量和ROS信号途径相关基因的分析,表明AtSep15-like对于ROS平衡具有显著的调控作用。遗传互补实验表明AtSep15-like通过AtUGGT发挥了抗逆作用。本论文的研究证明了植物Sep15-like在抗逆方面的生理功能及其与内质网压力和活性氧之间的关系,并可能通过UGGT发挥作用。
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