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第一部分:鞘内注射CatS抑制剂LHVS对骨癌痛大鼠机械性痛阈的影响目的探讨半胱氨酸组织蛋白酶S(Cathepsin S,CatS)抑制剂吗啉亮氨酸高苯丙氨酸乙烯基苯基砜(morpholinurea-leucine-homophenylalanine-vinyl phenyl sulfone,LHVS)对骨癌痛大鼠机械性痛阈的影响及可能的脊髓机制。方法雌性未交配SD大鼠50只,体重180~220g,采用随机数字表法将大鼠分为5组,每组10只:假手术组(S组)、骨癌痛组(BP组)、假手术+LHVS组(S+L组)、骨癌痛组+二甲基亚矾(DMSO)组(BP+D组)、骨癌痛+LHVS组(BP+L组)。大鼠左侧胫骨骨髓腔内接种乳腺癌肿瘤细胞Walker256建立骨癌痛模型,以Hank液代替Walker256建立假手术模型。造模前1天(基础值)及造模后第3、6、9、10、11、12天(T0~6)测定大鼠机械性缩爪阈值(MWT)。造模后第10~12天,S+L组、BP+L组分别鞘内注射LHVS50nmol/10μl,BP+D组鞘内注射5%DMSO10μl,分别于给药前及给药后第0.5、1、3、6、9、12、24小时(t0~7)测定左后肢机械性缩足反射阈值(MWT)。第12天给药后处死大鼠,免疫组化法测定L4~6左侧脊髓背角OX-42表达情况。结果与S组及S+L组比较,BP组及BP+D组大鼠t2~6时点MWT下降(P<0.01),T6时点脊髓背角OX-42阳性细胞数和平均光密度值(MOD)增加(P<0.01);与BP组及BP+D组比较,BP+L组大鼠T4~6时点MWT升高(P<0.05),并在t4时点达高峰(P<0.01),可持续至t6时点(P>0.05),T6时点脊髓背角OX-42阳性细胞数和平均光密度值(MOD)下降(P<0.01);S组和S+L组上述统计学指标无差异(P>0.05)。结论鞘内注射LHVS可抑制骨癌痛大鼠脊髓背角OX-42的表达并减轻骨癌痛,CatS可能在骨癌痛的产生和维持中起作用。~第二部分:鞘内注射CatS抑制剂LHVS对骨癌痛大鼠脊髓背角CatS、FKN表达及脑脊液FKN含量的影响目的观察鞘内注射CatS抑制剂LHVS后,骨癌痛大鼠脊髓背角CatS、FKN表达及脑脊液FKN含量变化,并探讨其可能机制。方法雌性未交配SD大鼠50只,体重180~220g,采用随机数字表法将大鼠分为5组,每组10只:假手术组(S组)、骨癌痛组(BP组)、假手术+LHVS组(S+L组)、骨癌痛组+二甲基亚矾(DMSO)组(BP+D组)、骨癌痛+LHVS组(BP+L组)。大鼠左侧胫骨骨髓腔内接种乳腺癌肿瘤细胞Walker256建立骨癌痛模型,以Hank液代替Walker256建立假手术模型。造模后第12天,S+L组、BP+L组分别鞘内注射LHVS50nmol/10μl,BP+D组鞘内注射5%DMSO10μl。给药后取大鼠脑脊液,Elisa法测定大鼠脑脊液中FKN含量,免疫组化法测定L4~6左侧脊髓背角CatS、FKN表达情况。结果与S组比较,BP组及BP+D组脊髓背角CatS的MOD值明显增加(P<0.01),S+L组脊髓背角CatS的MOD值增加(P<0.05);与BP组及BP+D组比较,BP+L组脊髓背角CatS的MOD值增加(P<0.01);各组脊髓背角FKN的MOD无明显差异(P>0.05);与S组及S+L组比较,BP组及BP+D组脑脊液中FKN含量增加(P<0.01),与BP组及BP+D组比较,BP+L组脑脊液中FKN含量减少(P<0.01)。结论骨癌痛大鼠脊髓背角CatS表达上调,脑脊液FKN含量上升;鞘内注射CatS抑制剂可抑制CatS的释放使之堆积于脊髓背角,并减少FKN在脑脊液中的含量。