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随着人口老龄化的不断加剧,寻找高效的抗衰老药物已成为当前医药学研究领域中的热点问题。覆盆子(FPZ)是一种蔷薇科悬钩子属植物的果实,在我国大量分布却少为人知,仅将其近成熟干燥果实作为补肝益肾的传统药材使用。现代药理研究表明覆盆子具有改善记忆、延缓衰老的功能,是极具潜力的抗衰老天然产物;且抗氧化是很多天然产物抗衰老的主要分子途径。因此探讨FPZ的抗氧化性能及其物质基础对于揭示FPZ抗衰老的分子机制及深层次的开发和利用具有重要意义。然而,目前尚未见相关系统研究。针对上述问题,本研究构筑了基于Fe3+还原能力、DPPH’和ABTS+清除能力的可见分光光度抗氧化评价体系和基于活性氧(H202.OH’和02·-)清除的化学发光抗氧化评价体系,比较了不同市售FPZ水提物(WEs)和醇提物(AEs)的抗氧化能力,探讨了它们的抗氧化机制;通过醇提物HPLC图谱体系的建立及与其抗氧化活性的相关性分析,确定了醇提物起抗氧化作用的主要物质类型;通过水提物糖含量与抗氧化活性的相关性分析,确定了糖含量高低与水提物抗氧化活性的关系;通过显微特征非腺毛个数与抗氧化活性的相关性分析,确定了抗氧化性能与非腺毛显微特征常数的关系。本研究所获结果对于覆盆子抗氧化机制及其活性物质的筛选具有积极意义。具体研究内容和结果如下:(1)覆盆子抗氧化活性评价体系的构建及抗氧化活性研究基于抗氧化剂将K3[Fe(CN)6].DPPH’和ABTS’+还原而引起溶液颜色的变化,构建了Fe3+还原能力(FRAP).DPPH’清除能力(ScDPPH’)和ABTS’+清除能力(ScABTS’+)的分光光度法抗氧化评价体系;H202、邻苯三酚自氧化产生的02.+、 Cu2+与H202发生Fetion反应产生的HO’可分别将Luminol氧化产生化学发光,而抗氧化剂的加入会清除活性氧,从而引起发光值降低,基于此建立了活性氧清除能力(ScH202.Sc02’、ScHO’)的Luminol-H202.Luminol-邻苯三酚-NaOH和Luminol-CuS04-H202化学发光抗氧化评价体系。以11个市售FPZ为对象,制备了FPZ的水提物(WEs)和醇提物(AEs),分别采用上述方法测定其抗氧化性能,求得其IC50(HDW)。结果表明,AEs和WEs的抗氧化机制均以Fe3’还原能力和对HO‘的清除能力为主导,且AEs的抗氧化性能远远优于WEs。(2)覆盆子化学成分的测定及其与抗氧化活性的相关性研究WEs中的主要活性物质为多糖和糖蛋白,采用硫酸.苯酚法测定其中的糖含量,并与WEs抗氧化能力进行相关性分析,结果表明在置信度为95%时,糖含量与WEs的EC50(FRAP)、IC50(ScDPPH)、IC50(ScABTS’+)、IC50(ScH202)均呈显著负相关、高相关(R=0.882,-0.752,-0.882,-0.709)。AEs中的主要活性成分为黄酮及其苷类化合物,采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法测定其中的总黄酮,并与抗氧化能力进行相关性分析,表明总黄酮含量与AEs的IC50(ScDPPH’)呈极显著负相关、高相关(R=-0.818,P=0.002)。以Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5.0μm)为固定相,乙腈和1%甲酸为流动相,梯度洗脱,建立了AEs的HPLC分析法。用该法对11个AEs样品分析,获得17个共有峰,经主成分分析获得4个主成分可以代表17个峰90%的信息。将主成分得分与AEs的抗氧化活性进行相关性分析,并经色谱比对发现:AEs产生ABTS’+、DPPH、O2’、HO’清除能力的主要物质为黄酮及其苷类;而强保留组分过多则会抑制AEs的Fe3+还原能力和对H202清除能力。(3)覆盆子显微特征常数的测定及其与抗氧化活性的相关性研究药材的显微特征常数(MCC)的差异与化学成分含量和药效间的相关性是中药分析的新热点。将容量分析法与显微鉴定法相结合,建立了MCC的测定方法,以非腺毛为MCC测定的依据。非腺毛MCC与’WEs的提取量和糖含量均呈显著负相关、高相关(R=-0.688,-0.700);与WEs的EC50(FRAP)、IC50(ScABTS’+)、 IC50(ScH202)、IC50(ScHO’)呈显著正相关、高相关(R=0.700,0.691,0.700);与AEs的IC50(ScH2O2)、呈显著负相关、高相关(R=-0.627)。