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目的:构建成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor2, FGF-2)的真核表达质粒,检测其对小鼠间充质干细胞C3H10增殖、成骨及成软骨分化作用的影响。方法:以质粒pAd-Trace-FGF-2为模板,PCR扩增目的基因FGF-2,经BglⅡ、Sal I双酶切后连接至pIRES2-EGFP表达载体中获得pIRES2-EGFP-FGF-2真核表达质粒,脂质体转染到C3H10细胞中,另设pIRES2-EGFP空载体转染组和空白细胞对照组。RT-PCR及Westernblot法检测各处理组FGF-2的表达水平,MTT法和流式细胞计数检测细胞的增殖活力及细胞周期分布,RT-PCR检测骨和软骨相关标准蛋白、Wnt信号通路相关基因的mRNA水平表达变化,Western blot检测Ⅱ型胶原(collagenⅡ,ColⅡ)的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨基质的分泌情况。结果:重组表达质粒pIRES2-EGFP-FGF-2经双酶切及测序证实FGF-2正确插入相应多克隆区域;质粒转染C3H10细胞后,FGF-2基因的mRNA和蛋白水平表达较两个对照组明显增高,细胞增殖活力明显增高(P<0.05),软骨相关标志物Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、ColⅡ、蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)的mRNA水平较两个对照组均显著增高(P<0.05),骨钙蛋白(osteocalcin,OC)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)等成骨相关蛋白的mRNA转录水平无明显升高(P>0.05),Wnt信号通路相关分子Wnt5a及Fzd8mRNA转录水平降低(P<0.05),FGF-2转染组细胞甲苯胺蓝染色呈现紫红色异染。结论:成功构建FGF-2基因重组真核表达质粒,FGF-2过表达可提高C3H10细胞的增殖活力,对C3H10细胞有成软骨效应,但短期成骨效应不明显,FGF-2对C3H10的生物学效应可能与下调Wnt5a及受体Fzd8的表达有关。