流感病毒是呼吸道感染的重要病原体,流感的大流行对我国乃至世界人民群众的健康产生了极大的威胁。中医药抗流感病毒的优势不在于直接抗病毒,而在于整体调节,调整机体的免疫状态,增强机体抗流感病毒的免疫力,因此,加强中医药抗流感病毒的研究意义深远。本实验从整体到细胞分子水平上,探讨了疏风宣肺和解表清里两种不同治法方药对流感病毒感染小鼠的治疗作用机制,为疏风宣肺抗流感方药和解表清里抗流感方药的临床应用提供理论依据。目的：研究疏风宣肺抗流感方和解表清里抗流感方两种不同治法方药对FM1流感病毒感染小鼠肺指数,肺脏的病理损伤,肺组织中病毒血凝滴度和神经氨酸酶的含量,以及肺组织中IL-1、IL-8、TNF-α、MMP-1、MMP-9mRNA表达量的影响作用。为这两种中药复方应用于临床抗流感提供理论支持和依据。方法：实验一疏风宣肺、解表清里两种抗流感方对流感病毒感染小鼠死亡保护率的影响将ICR雄性小鼠随机平均分为9组：正常对照组、模型对照组、达菲组、疏风宣肺抗流感方和解表清里抗流感方(大、中、小剂量)组(以下均简称疏大组、疏中组、疏小组、解大组、解中组、解小组)。每组10只,除正常对照组外,各组小鼠在乙醚轻度麻醉下感染流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1),用50ul4LD50的流感病毒液滴鼻感染,0.05m1/只,正常对照组以等量的生理盐水滴鼻对照。从感染当天开始连续观察14天,逐日观察记录小鼠的死亡情况,并计算出死亡率和死亡保护率。实验二疏风宣肺、解表清里两种抗流感方对流感病毒感染小鼠肺指数及其肺脏病理变化的影响动物分组、造模、给药方法同上。小鼠感染流感病毒后第5天,摘眼球放血处死小鼠,摘取并称量肺组织重量,计算肺指数；制作切片在光镜下观察肺组织病理形态学变化。实验三疏风宣肺、解表清里两种抗流感方对流感病毒感染小鼠病毒血凝滴度及神经氨酸酶活力的影响动物分组、造模、给药方法同上。分别取感染后第5天小鼠的肺组织,置于匀浆机中,按肺重(g)/生理盐水(m1)=1/9的比例加入生理盐水,研磨制成肺匀浆,离心(2000r,10min,4℃),然后取上清液按常规方法做微量血凝实验及检测病毒的神经氨酸酶含量。实验四疏风宣肺、解表清里两种抗流感方对流感病毒感染小鼠肺组织IL-1、IL-8、 TNF-α、MMP-1、MMP-9mRNA表达量的影响动物分组、造模、给药方法同上。分别取感染后第5天小鼠的肺组织,置于匀浆机中,按肺重(g)/生理盐水(n11)=1/9的比例加入生理盐水,研磨制成肺匀浆,离心(2000r,10min,4℃),然后提取上清液,采用实时定量PCR芯片技术检测IL-1、IL-8、TNF-α、MMP-1、MMP-9mRNA表达量。结果：实验一疏风宣肺、解表清里两种抗流感方对流感病毒感染小鼠死亡保护率的影响结果显示,模型组的死亡率为80%(存活率为20%),阳性对照药达菲组的死亡率为10%,经x2检验,P<0.01,具有明显的死亡保护作用；疏中组的死亡率为18.2%,与模型组比较,经x2检验,P<0.01,同样具有明显的死亡保护作用；疏小组和解小组的死亡率都为27.3%,与模型组比较P<0.05,说明也具有一定的死亡保护作用；其他组与模型组比较则无统计学差异。此外,达菲组和疏中组比较,P>0.05,二者间无差异,说明达菲组和疏中组的死亡保护作用相当。实验二疏风宣肺、解表清里两种抗流感方对流感病毒感染小鼠肺指数及其肺脏病理变化的影响小鼠感染FM1流感病毒后,模型组的肺指数显著高于正常组(P<0.01)。与模型组比较,达菲组和两种抗流感中药方各组治疗后对小鼠的肺指数有降低作用,表现出明显的肺指数抑制作用。其中,疏大组、解大组的肺指数与模型组比较P<0.05；达菲组、疏中组、疏小组,解中组、解小组的肺指数与模型组比较P<0.01。疏中组的肺指数抑制率为33.33%,效果明显,但是两种中药方对肺指数的抑制作用不如达菲组(肺指数抑制率为43.86%)效果好。HE染色光镜观察：正常组小鼠肺组织结构形态完好,肺泡壁厚度及大小均正常,周围未见炎性细胞浸润。模型组小鼠的肺组织浸满炎性细胞,正常的肺组织结构形态消失,肺泡壁增厚,大量的淋巴细胞、中性粒细胞等浸润,血管内可见充血。达菲组肺泡囊、肺泡等组织结构形态恢复,偶见少量的炎细胞浸润。各中药组均不同程度的改善了肺组织的炎性病变,其中疏中组的治疗效果明显,炎性细胞减少,肺组织的形态结构基本恢复。实验三疏风宣肺、解表清里两种抗流感方对流感病毒感染小鼠病毒血凝滴度及神经氨酸酶活力的影响正常组小鼠肺中无病毒,神经氨酸酶的含量最低。小鼠感染FMl流感病毒后,模型组的病毒血凝滴度和神经氨酸酶含量急剧升高,与正常组比较有显著差异,P<0.01。其他各组与模型组比较P<0.01,差异显著。经过抗病毒治疗后,达菲组和各中药组的病毒血凝滴度和神经氨酸酶含量均有显著降低,发挥了很好的抗病毒作用。各治疗组与模型组比较,P<0.01。其中,达菲组的治疗效果最好,疏中组次之。实验四疏风宣肺、解表清里两种抗流感方对流感病毒感染小鼠肺组织IL-1、IL-8、 TNF-α、MMP-1、MMP-9mRNA表达量的影响小鼠感染FM1流感病毒后,模型组小鼠的肺组织匀浆中IL-1、IL-8、TNF-α的含量明显升高,与正常组比较差异显著,P<0.01；与模型组比较,达菲组、疏大组、疏中组、疏小组、解大组、解中组P<0.01,模型组与解小组比较P<0.05,均明显降低了肺组织中的IL-1、IL-8、TNF-α的含量,产生明显的抑制作用。模型组小鼠肺组织中MMP-1、MMP-9mRNA表达量与正常组比较明显升高,P<0.01；与模型组比较,达菲组、疏中组、疏小组、解大组、解中组、解小组中MMP-1mRNA表达量有不同程度的降低,P<0.01；而疏大组则无明显变化。与模型组比较,达菲组、疏小组、解中组、解小组中MMP-9mRNA表达量明显降低,P<0.01；疏中组也有所降低,P<0.05；而疏大组和解大组的变化则无统计学意义。结论：上述二种方药对流感病毒感染性肺炎小鼠的治疗作用具有明显差异,疏风宣肺方的总体效果要优于解表清里方,可能与疏风宣肺组方中有金银花、连翘、大青叶、板蓝根等有明显的抗病毒和解热消炎作用有关。同时也与小鼠感染流感病毒后既有风热袭表、热毒袭肺的病机,又兼外感风寒湿邪、入里化热、壅遏于肺、肺失宣降的病机,更符合疏风宣肺抗流感方的病机。治疗剂量以中剂量效果为最佳。