植物表达载体pBI121-RC7的构建及转化杨树的研究

来源 :中南林业科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dubo2536
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本研究利用几丁质酶RC7基因,构建pBI121-RC7载体,并通过冻融法将其导入农杆菌感受态中;同时建立湘林90(P.deltoides’XL-90’)的离体再生系统,利用农杆菌介导法,以湘林90叶片为受体,导入RC7基因,使转基因植株获得抗真菌病害的能力。通过诱导腋芽分化,以获得的叶片作为培养材料,进行愈伤组织培养、不定芽生长发育培养和生根培养,经过筛选,得出湘林90离体再生体系的最适培养基:1)MS+6-BA1.0mg·L-1+TDZ0.005mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂粉8g·L-1诱导湘林90带腋芽的茎段;2)1/2MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1+TDZ0.01mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂粉8g·L-1,诱导湘林90诱导愈伤组织;3)MS+6-BA0.5mg·L-1·NAA0.2mg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂粉8g·L-1,诱导湘林90不定芽生长发育;4)1/2MS+NAA0.3nmg·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂粉8g·L-1,诱导湘林90长出理想根系。本研究还以湘林90离体再生体系的建立为基础,研究了其遗传转化的最优条件:1)湘林90叶片的Kan临界浓度为20mg·L-1;2)农杆菌LBA4404在28℃,170rpm黑暗条件下摇菌,19h可以达到对数生长;3)用OD600=0.6的菌液侵染时间15min,共培养3d。通过对外植体再生体系及转化体系的研究,最终完成外植体转化,获得抗性芽101株,经过筛选26株存活,经过PCR分子检测后,得到3株阳性植株。
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