户尘螨过敏原实验研究

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尘螨是最重要吸入物过敏原之一,尘螨过敏反应的发病率不断增加,日益受到人们重视。尘螨过敏可表现为过敏性鼻炎、过敏性哮喘和过敏性皮肤疾患。尘螨的过敏反应可发生在各个年龄阶段,并且在婴幼儿过敏性哮喘中尘螨是最主要的过敏原。因此,有关尘螨的研究一直是变态反应学科的研究热点。 目前,国内培养的螨多为混合螨,为保证本研究的可靠性和重复性必须应用高纯度的户尘螨螨体原料。本研究纯种户尘螨螨体购自于Allergon公司,采用Coca’s液、裂解液及Trizol法提取纯种户尘螨螨体蛋白后,在蛋白质的回收率方面进行比较,结果为:C0:C1:L:T=5.7:6.3:9:8;即回收率:裂解液>Trizol法>Coc a’s液。在蛋白质浓度检测方法中,本研究率先使用了二喹啉甲酸(BCA)法检测蛋白浓度取得了较好结果。 应用Coc a’s液、裂解液及Trizol法提取纯种户尘螨螨体蛋白后,经过双向电泳,实验结果为:Coca’s液提取的蛋白仅仅有少量低分子量的蛋白点:用裂解液提取的蛋白可见明显增多低分子量的蛋白点,但无中分子量的蛋白点;Trizol法提取的蛋白可见中分子量的蛋白点如174-178Kd和133.0Kd的蛋白质。结合蛋白质浓度测定我们发现:使用Coca’s液提取的尘螨蛋白质浓度低,蛋白点少。使用裂解液提取的尘螨蛋白质浓度虽然较高,但是没有中分子量的蛋白点,不能全面反映尘螨的过敏原。使用Trizol法提取的蛋白质浓度中等,有中分子量蛋白点,反映的蛋白点更加全面。 纯种户尘螨螨体经Trizol液提取后进行双向电泳,在考染和银染时出现6个特征性的蛋白点,二个为位置彼此孤立的酸性蛋白,其中一个酸性蛋白(2D31点)的等电点(pI)和分子量(MW)(以下pI和MW表示方法相同)分别为4.4和133.0Kd;另一个为(2D161点)4.81和35.4Kd。另有4个位置彼此非常接近的中性蛋白,分别为(2D107点)7.2和49.5Kd、(2D 116点)7.2和46.4Kd、(2D105点)6.9和50.2Kd、(2D 114点)6.9和47.0Kd。并且,在十二次的双向电泳中均发现这6个位置和形态独特的蛋白点,这些特征性的蛋白点可能为此种纯种户尘螨螨体在双向电泳时比较特征性的图谱,作为一种双向电泳的指纹图谱,在鉴定
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