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猪细环病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)是一种小的,无包膜的单链环状DNA病毒。首次发现于1997年,一名日本急性肝炎患者输血后,在病人血清中检测到一种非包膜单链环状病毒,将其命名为TTV(TT Virus)。这是第一个“人类圆环病毒”,具有单链环状DNA基因组(ssDNA),属于指环病毒科。随后TTV也在家养的动物如猪、鸡、牛、羊、猫和狗身上发现。TTSuV可以分为两个型,分别是TTSuV1和TTSuV2,TTSuV1属于细环病毒属,TTSuV2属于Kappa细环病毒属,均可感染猪。近年来,不同国家在猪体内均发现有TTSuV。同时,在灵长类动物如猩猩、长臂猿等体内也发现存在有TTV。TTSu V主要通过动物粪口途径传播,也可通过垂直传播途径如胎盘、子宫方式传播。TTSuV单独感染无特异的临床症状,但TTSuV常与猪的其他病毒如猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)等共感染,具有某种未知的协同效应,可加重动物病情。目前TTSuV在全世界的猪场中广泛存在,但现有的检测方法仅限于PCR法进行病毒病原学检测或ELISA法进行血清学检测。临床上还没有商品化试剂盒来专一性检测TTSuV抗体。因此,建立一种快速、高效、敏感的抗体检测方法十分重要。同时,目前对于TTSuV的致病机理的研究还很少。因此,开展TTSuV病毒的序列分析,建立其抗体检测方法将为该病毒的早期发现和治疗提供理论基础和技术支撑,同时将有助于对不同地区猪群中主流毒株的分型以及不同猪群中的病毒的感染情况进行深入了解。1.本研究采集2016~2017年河南省南阳市周边地区多个规模化养猪场发病猪的病料,并进行基因组DNA提取,根据GenBank内报道的参考序列,设计3对覆盖TTSuV基因组全长的特异性引物进行扩增和测序,最终成功获取21株TTSuV基因组序列,分别命名为HeN1-A1、HeN1-A2、HeN1-A6、HeN1-A7、HeN1-A8、HeN1-A9、HeN1-A10、HeN1-A11、HeN1-A12、HeN1-A31、HeN1-A32、HeN1-A51、HeN1-A52、HeN1-A132、HeN2-A2、HeN2-A4、HeN2-A5、HeN2-A9和HeN2-A11。通过与GenBank收录的120株TTSuV的参考序列进行序列同源性和进化树分析表明,HeN1-A2、HeN1-A6、HeN1-A8、HeN1-A9、HeN1-A11、HeN1-A31、HeN1-A52和HeN1-A132全基因序列的同源性为95.7%~97.6%,差异较小;HeN1-A51、HeN1-A32、HeN1-A12、HeN1-A1和HeN1-A10序列基因的同源性为84.3%~86.6%,差异较小;HeN2-A11、HeN2-A9、HeN2-A4和HeN2-A5序列基因的同源性为78.8%~99%,差异也较小。而HeN1-A7和HeN2-A2与全基因组序列比较同源性分别为33.2%~34.3%和27.6~29.6%左右,说明这两个基因序列和其他的基因序列的同源性差异较大,因此在进化树上单独分支。2.本研究参考GenBank中TTSuV1的Cap基因序列,设计特异性引物进行扩增,连接pcDNA3.1,构建重组表达载体pcDNA-TTSuV1,通过转染HEK293T细胞系,成功建立了TTSuV的间接免疫荧光抗体检测方法(Indirect Immunofluorescence,IFA)。对2016~2017年采集的河南省南阳市周边地区多个规模化养猪场血清进行检测,结果显示临床血清的阳性率为48.48%~65.4%(65.4%、50%、48.48%、51.28%和55.36%),均在50%左右。表明我们建立的TTSuV的间接免疫荧光抗体检测方法具有较好,可以用于临床检测。