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根据HCV基因组5’非翻译区（5’UTR）的序列，借助计算机软件模拟，设计并构建了一组针对该区序列中不同靶位的人工M1GS核酶（M1GS-HCV/C20、M1GS-HCV/C67、M1GS-HCV/C76、M1GS-HCV/T86、M1GS-HCV/C89和M1GS-HCV/T160）。通过双酶切、PCR及测序等方法证实，所构建的这六种M1GS重组质粒均克隆成功。此外，截取包括HCV5’UTR在内的部分基因片段，将其成功插入至pGEM-9z(f)质粒的MCS中，构建了含有底物DNA片段的另一个重组质粒—pGEM-HC。分别将各M1GS重组质粒的转录产物与pGEM-HC质粒的转录产物在体外混合，结果发现M1GS-HCV/C20、M1GS-HCV/C67和M1GS-HCV/C76三种人工核酶显示出对底物RNA片段的切割活性，其中M1GS-HCV/C67和M1GS-HCV/C76活性相对较高，而M1GS-HCV/T86、M1GS-HCV/C89和M1GS-HCV/T160这三种人工核酶则没有明显的切割活性。进一步将体外初筛有效的三种M1GS核酶基因插入逆转录载体质粒pLXSN中，构建相应的M1GS真核表达载体。与此同时，将HCV5’UTR的DNA片段插入至pGEF-N1质粒的绿色荧光蛋白基因的上游，成功构建了受控于HCV5’UTR的绿色荧光融合表达载体。再分别将各M1GS真核表达载体与该绿色荧光融合表达载体通过脂质体共转染Hela细胞（同时以表达红色荧光蛋白的质粒pDsRed2-C1作为转染的内对照），建立了一种有效的M1GS核酶胞内复筛系统。通过荧光显微观察绿色荧光的变化，并进一步通过Typhoon9200对各组细胞中绿色荧光的表达强度进行扫描。结果发现：核酶M1GS-HCV/C20和M1GS-HCV/C76可大大抑制绿色荧光蛋白的表达，抑制率分别为77.54±1.97%和80.35±1.48%，而核酶M1GS-HCV/C67对绿色荧光的抑制作用则相对较弱，仅为58.82±0.88%。此外，实验过程中还针对M1GS核酶与底物在体外进行切割反应的条件作了一些探索。总之，本研究成功构建并筛选的三种M1GS核酶，不仅在体外可实现对HCV基因组5’UTR的靶向切割、而且再胞内也同样具有明显的反义抑制效应，从而为新型抗HCV反义药物的进一步研究与开发奠定了基础。