【摘 要】
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猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒感染（Classical swine fever virus,CSFV）引起的猪的一种烈性传染病。近些年来,猪瘟的流行特点发生了很大变化,猪瘟疫苗免疫失败现象也时有发生。因此深入研究猪瘟病毒与宿主之间的相互作用,将为猪瘟的科学防控提供理论指导。本课题从体外和体内水平进行研究,分别用猪瘟病毒石门株进行感染猪和猪肾细胞系（PK-15
【基金项目】
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国家自然科学基金（U1405216,U1305212）； 福建省引进高层次创业创新人才计划（省引才“百人计划”）；
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猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒感染（Classical swine fever virus,CSFV）引起的猪的一种烈性传染病。近些年来,猪瘟的流行特点发生了很大变化,猪瘟疫苗免疫失败现象也时有发生。因此深入研究猪瘟病毒与宿主之间的相互作用,将为猪瘟的科学防控提供理论指导。本课题从体外和体内水平进行研究,分别用猪瘟病毒石门株进行感染猪和猪肾细胞系（PK-15细胞）,研究其对IL-6、SOCS3和STAT3表达及STAT3活化的影响。在动物水平上,我们将猪瘟病毒石门株注射SPF实验猪,攻毒5天后进行检测,分别提取各组织的RNA和蛋白样品,使用RT-PCR和qRT-PCR方法检测IL-6和SOCS3的表达情况,进一步应用Western blotting检测炎症因子IL-6下游STAT3的活化情况,即p-STAT3的表达情况。对PK-15细胞感染后收取制备5个不同时间点的RNA样品和蛋白样品,通过RT-PCR和qRT-PCR检测 IL-6 和 SOCS3 的 mRNA 表达水平,Western blotting 检测 STAT3的活化情况。此外,使用shRNA干扰技术,我们成功构建了稳定干扰IL-6Rα、STAT3和SOCS3表达的PK-15细胞系。猪瘟病毒感染稳定干扰IL-6Rα表达的PK-15细胞,研究其对p-STAT3表达的影响;猪瘟病毒分别感染稳定干扰STAT3与SOCS3表达的PK-15细胞,探讨其对上游炎性细胞因子IL-6表达的影响。另一方面,我们在PK-15细胞中稳定过表达STAT3野生型以及STAT3持续活化型,即STAT3-D661V或STAT3-Y640F,研究其对IL-6的表达影响。结果如下:一、猪瘟病毒石门株感染SPF猪后,在脾脏、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结、下颌淋巴结和扁桃体这些免疫组织中,IL-6、SOCS3以及p-STAT3都有显著上调,表明猪瘟病毒感染可以在动物水平上诱导炎症因子IL-6的表达,并激活JAK-STAT3信号通路及细胞因子信号通路的负调控蛋白SOCS3;二、猪瘟病毒感染PK-15细胞后,IL-6、SOCS3以及p-STAT3都显著上调,且在一定时间内都随着病毒感染时间的增加呈现先升高后下降的趋势,表明猪瘟病毒感染可以在体外细胞水平上诱导IL-6的表达,激活STAT3及细胞因子信号通路的负调控蛋白SOCS3;三、在稳定干扰IL-6Rα的PK-15细胞系中,与对照组相比,在猪瘟病毒感染后p-STAT3的表达显著下调,表明猪瘟病毒感染可以激活IL-6/IL-6Rα介导的STAT3活化;四、在稳定干扰STAT3的PK-15细胞系中,与对照细胞相比,在猪瘟病毒感染后p-STAT3表达显著下调,而上游的IL-6表达水平显著上调。然而,与对照细胞相比,过表达STAT3野生型以及STAT3持续活化型的PK-15细胞,在被猪瘟病毒感染后,其IL-6的表达显著下调。表明STAT3蛋白的活化状态与猪瘟病毒诱导产生的IL-6水平存在负相关关系;五、在稳定干扰SOCS3表达的PK-15细胞系中,与对照组相比,在猪瘟病毒感染后,p-STAT3的表达水平显著上调,而IL-6的表达水平下调。表明猪瘟病毒诱导产生的宿主SOCS3可能负调控STAT3的活化,也影响IL-6的表达水平;以上研究结果表明,猪瘟病毒感染宿主会激活IL-6介导的JAK/STAT3信号通路,STAT3蛋白的变化与猪瘟病毒诱导产生的IL-6有着负相关关系;猪瘟病毒诱导的SOCS3可能负调控STAT3的活化,而与IL-6之间存在着正相关关系,这些结果将为深入研究猪瘟病毒的致病机理提供新的理论依据。
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