【摘 要】
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研究目的:流感的季节性流行和大爆发,造成了很高的发病率和致死率,对于人类社会危害性极高。由于流感病毒变异速度快且难以预测,大大地降低了疫苗的有效预防效果。目前,FDA批准上市的抗流感病毒药物只有M2离子通道抑制剂和神经氨酸酶抑制剂两种,而且面临日益严重的耐药性问题,因此迫切需要研制新的药物。为了满足对新型抗流感病毒药物的需求,本论文从海洋贝类生物海瓜子中分离得到一个具有抗流感病毒活性化合物焦脱镁叶
【基金项目】
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国家自然科学基金（81773556）； 广东省科技厅公益基金项目（2015C1040630）； 南方医科大学高层次人才引进科研项目（B1040903）；
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研究目的:流感的季节性流行和大爆发,造成了很高的发病率和致死率,对于人类社会危害性极高。由于流感病毒变异速度快且难以预测,大大地降低了疫苗的有效预防效果。目前,FDA批准上市的抗流感病毒药物只有M2离子通道抑制剂和神经氨酸酶抑制剂两种,而且面临日益严重的耐药性问题,因此迫切需要研制新的药物。为了满足对新型抗流感病毒药物的需求,本论文从海洋贝类生物海瓜子中分离得到一个具有抗流感病毒活性化合物焦脱镁叶绿酸-a（PPa,Pyropheophorbide a）,为卟啉类化合物,我们对该化合物进行了深入的抗甲型流感病毒活性和作用机制研究。同时,以原卟啉（Protoporphyrin IX,PPIX）为原料,对其进行了结构改造,得到了5个衍生物,并对这些化合物进行了抗甲型流感病毒活性和作用机制研究,为研制新型抗流感病毒药物打下了基础。研究方法:1.应用活性跟踪方法在海瓜子甲醇提取物分离得到活性化合物PPa。2.以PPIX为原材料合成了 5个衍生物PPIX-1至PPIX-5。3.用MTT法检测化合物的细胞毒性。4.通过测定化合物对病毒致细胞病变的抑制程度和空斑抑制实验来检测抗甲型流感病毒活性。5.间接免疫荧光和和qRT-PCR检测化合物在蛋白和基因水平上对病毒复制的影响。6.采用四种不同给药模式、单轮复制时间点给药实验、神经氨酸酶抑制实验、血凝抑制实验、溶血抑制实验、合胞体抑制实验、荧光分光光谱、核磁共振（NMR）和等温滴定量热法（ITC）等实验来研究化合物抗流感病毒的作用机制。实验结果:1.PPa能够抑制病毒引起的细胞病变,对甲型流感病毒A/Puerto Rico/8/34（H1N1）、A/Puerto Rico/8/34NA-H274Y 突变株（H1N1）、A/FM/1/47（H1N1）、A/Aichi/2/68（H3N2）的 IC50 分别是 0.17±0.15、0.56±0.53、0.88±0.30 和 0.66±0.59μg/mL;能够抑制流感病毒在宿主细胞中的NP蛋白和HA蛋白mRNA的表达。2.PPa作用于病毒早期进入阶段,但并不主要作用于HA蛋白。通过荧光分光光谱、NMR和ITC等实验推测其可能直接作用于病毒包膜脂质。3.与PPa相似,PPIX对多株甲型流感病毒株均有较好的抑制活性,通过机制实验验证其抗流感病毒的作用靶点不在HA包膜蛋白而可能是病毒包膜的脂质上。4.在PPIX的羧基连上脂肪醇或芳香醇会降低原卟啉的抗流感病毒活性。实验结论:PPa和PPIX均具有较强的抗甲型流感病毒活性,且作用机制基本相同。研究发现两者对多种甲型流感病毒都具有抑制活性,具有较好的开发潜力,可以作为进一步研究的先导化合物。
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