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背景和目的乳腺癌(Breast cancer,BC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,也是女性的常见癌症。2020年全球约有230万乳腺癌新发病例,并且约有68.5万乳腺癌死亡病例。乳腺癌为高度异质性的肿瘤,根据基因表达谱的差别可以分为管腔A型(Luminal A)、管腔B型(Luminal B)、HER-2过表达型、三阴型(triple-negative)和正常乳腺样型。其中Luminal A型是较为多见的乳腺癌分子亚型,该亚型患者对内分泌治疗敏感,但在临床治疗中有较高复发风险。因此,对于Luminal A型乳腺癌病人不良预后背后的分子调控机制以及相关的靶向治疗仍然有待进一步探索。成纤维细胞生长因子受体1(Fibroblast growth factor receptor 1,FGFR1)是FGFR家族成员之一,是一种具有受体酪氨酸激酶(Receptor tyrosine kinase,RTK)活性的跨膜蛋白质。近年来研究发现FGFR1在多种恶性肿瘤组织中高表达后可影响细胞的增殖和迁移能力。高淋巴转移率的乳腺癌患者肿瘤组织中出现FGFR1的高表达会引起生存期显著降低,提示FGFR1可能是影响乳腺癌发生及进展的重要因素。我们前期研究发现,Luminal A型乳腺癌患者FGFR1的高表达会显示出预后不良,提示FGFR1可能会影响Luminal A型乳腺癌发生、进展及预后,但FGFR1对Luminal A型乳腺癌的生长、浸润、转移的作用机制尚不明确。有研究显示FGFR1通过激活细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal-regulated kinases 1 and 2,ERK1/2)信号通路调节乳腺细胞的生长、分化和转化。本课题通过构建FGFR1过表达的Luminal A型乳腺癌细胞MCF7和T-47D,观察FGFR1对细胞增殖、迁移、ERK通路关键蛋白和组蛋白乙酰转移酶MYST2蛋白表达的影响,并通过ERK通路抑制剂PD98059探索ERK信号通路是否参与FGFR1对乳腺癌细胞MCF7和T-47D生物学功能的调控,并探索ERK信号通路是否参与FGFR1对MYST2蛋白表达的调控作用,以期为预后不良Luminal A型乳腺癌的实验室研究和临床治疗提供新的思路。方法1.将人类FGFR1质粒p WZL-Neo-Myr-Flag-FGFR1分别转染Luminal A型乳腺癌细胞MCF7和T-47D,用qPCR和Western blot检测细胞FGFR1 mRNA和蛋白表达水平。2.通过CCK-8实验、平板克隆形成实验和细胞划痕愈合实验检测过表达FGFR1对MCF7和T-47D细胞增殖、克隆形成和迁移能力的影响。3.利用Western blot检测过表达FGFR1对Luminal A型乳腺癌细胞p-ERK1/2以及下游信号蛋白c-Fos的影响;进一步用ERK1/2信号通路抑制剂PD98059处理过表达FGFR1的MCF7和T-47D,Western blot检测p-ERK1/2和c-Fos蛋白表达变化;CCK-8和细胞划痕愈合实验检测PD98059对过表达FGFR1的Luminal A型乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。4.通过qPCR及Western blot方法检测过表达FGFR1对Luminal A型乳腺癌细胞MYST2表达水平的调控作用;使用ERK抑制剂PD98059处理过表达FGFR1的MCF7和T-47D,Western blot检测MYST2蛋白表达变化。结果1.过表达FGFR1促进Luminal A型乳腺癌细胞增殖和迁移(1)转染人类FGFR1质粒后,MCF7和T-47D细胞的FGFR1 mRNA和蛋白表达水平显著上调,提示成功构建过表达FGFR1的Luminal A型乳腺癌细胞株。(2)CCK-8法检测结果显示,与对照组细胞相比,过表达FGFR1后在24、48和72 h时MCF7/FGFR1和T-47D/FGFR1细胞的增殖能力均显著增强;MCF7/FGFR1和T-47D/FGFR1细胞的克隆集落数量分别增加至186±4和174±3,显著多于对照组细胞(P<0.05和P<0.01);细胞划痕愈合实验结果也显示过表达FGFR1的MCF7和T-47D细胞迁移能力显著强于对照组细胞(P<0.01)。2.过表达FGFR1通过ERK信号通路调控细胞增殖和迁移(1)过表达FGFR1后,MCF7与T-47D细胞的p-ERK1/2与总ERK1/2蛋白比值明显高于对照组(P<0.01和P<0.05);用10μM及20μM的PD98059(ERK1/2信号通路抑制剂)处理后,显著抑制FGFR1过表达引起的pERK1/2蛋白和下游c-Fos蛋白的上调。(2)使用DMSO处理过表达组细胞,对细胞增殖和迁移能力的影响与未处理过表达组一致,使用ERK信号通路抑制剂PD98059后,明显抑制FGFR1过表达引起的MCF7及T-47D细胞增殖和迁移能力的促进作用。3.过表达FGFR1通过ERK信号通路促进MYST2表达有研究发现雌二醇可通过ERK信号通路促进乳腺癌细胞中的组蛋白乙酰转移酶MYST2表达,但FGFR1是否调控Luminal A型乳腺癌细胞MYST2的表达及该调控作用是否与ERK信号通路有关,尚未见相关报道,我们对此展开探索。结果显示,MCF7/FGFR1与T-47D/FGFR1组细胞中MYST2的mRNA水平显著高于对照组(P<0.01);MCF7/FGFR1与T-47D/FGFR1组细胞中MYST2蛋白水平亦均显著高于对照组(P<0.01);使用DMSO处理过表达组细胞,对MYST2蛋白表达水平的影响与未处理过表达组一致,使用工具药PD98059处理后,明显抑制FGFR1过表达引起的MYST2蛋白的上调(P<0.01)。结论在Luminal A型乳腺癌细胞MCF7和T-47D中,FGFR1可通过激活ERK信号通路促进MYST2蛋白表达,并促进细胞的增殖和迁移能力。