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目的结肠癌为临床常见恶性肿瘤之一,严重危害人类的生命与健康,它的发生遵循“正常粘膜一腺瘤一腺癌”的组织发生顺序,被称为大肠腺瘤-癌序列(colorectal adenoma-carcinoma sequence)。在我国常见的恶性肿瘤中,结肠癌的发病率位于第五位[2],并有逐年增高的趋势。近年来提出的肿瘤干细胞理论认为肿瘤干细胞具有自我更新、无限增殖以及多向分化的潜能,是肿瘤的启动细胞,可能是恶性肿瘤的种子和根源,只有针对肿瘤干细胞的靶向治疗才能最终治愈肿瘤。这个理论为肿瘤的预防和治疗提供了新的方向。去泛素酶基因(USP22)是一个新鉴定的肿瘤干细胞标记家族的成员,目前已经发现USP22在DNA转录、细胞恶变以及细胞周期进程中发挥着重要作用,已成为干细胞领域研究的一个热点。Nanog是近年来所发现的胚胎干细胞(ESCs)中最重要的转录因子,它在ESCs的自我更新能力和多向分化潜方面发挥着重要作用,并且发现在多种肿瘤中高表达。目前,国内对USP22, Nanog在结肠癌方面的联合报道甚少。本研究通过检测USP22和Nanog在结肠腺瘤和腺癌组织中的表达,探讨二者在结肠癌发生发展过程中的作用,为临床的诊断治疗以及预后的判断提供理论依据。材料与方法选取郑州大学第一附属医院2010年11月至2011年12月外科手术或内镜下切除后的存档石蜡标本155例,所有标本均经病理明确诊断。其中结肠腺癌80例。结肠腺瘤伴不典型增生35例。癌旁正常组织40例(取自上述40例结肠癌患者癌旁>5cm组织)。采用免疫组织化学方法(streptavidin-peroxidase, SP)分别检测结直肠癌组织,结肠腺瘤组织及正常结直肠粘膜组织中的USP22基因和Nanog基因的表达水平,并分析二者的表达水平与肿瘤患者的性别、年龄、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期的关系以及USP22和Nanog基因表达的相关性。实验操作步骤严格按照SP试剂盒说明书进行。USP22一抗工作浓度为1：50,Nanog一抗工作浓度为1：100。用PBS代替一抗作空白对照,用已知阳性切片作阳性对照。采用SPSS17.0软件包对数据进行分析处理。统计学方法采用χ2检验和spearman等级相关分析。以α=0.05作为检验水准。结果(1)USP22在癌旁正常组织,结肠腺瘤和结肠腺癌中的阳性表达率分别为22.5%,31.4%,55.0%,结肠癌组织USP22阳性的表达率明显高于结肠腺瘤和正常结直肠粘膜组织(P<0.05),但结肠腺瘤和癌旁正常组织阳性的表达率差异无统计学意义(P>0.05)。USP22在Dukes分期A+B期中和C+D期中表的阳性表达率分别为43.8%(21/48)、71.9%(23/32)；在高分化癌和中低分化癌中的阳性表达率分别为38.5%(10/26)、63.0%(34/54)；没有淋巴结转移组、有淋巴结转移组的阳性表达率分别为44.9%(22/49)、71%(22/31)；未侵及浆膜层组、侵及浆膜层以外组的阳性表达率分别为30.4%(7/23)、64.9%(37/57)。USP22的表达与Dukes分期,组织学分级,淋巴结的转移以及浸润深度均有关(P<0.05),与年龄和性别无明显关系。(2) Nanog在癌旁正常组织,结肠腺瘤和结肠腺癌中的阳性表达率分别为17.5%,54.3%,82.5%,各组间差异均有统计学意义(P值均<0.05)。Nanog在Dukes分期A+B期中和C+D期中的阳性表达率分别为75.0%(36/48)、93.8%(30/32)；在高分化癌和中低分化癌中的阳性表达率分别为61.5%(16/26)、92.6%(50/54)；没有淋巴结转移组、有淋巴结转移组的阳性表达率分别为75.5%(37/49)、93.5%(29/31)；未侵及浆膜层组、侵及浆膜层以外组的阳性表达率分别为47.8%(11/23)、96.5%(55/57)。Nanog的表达与Dukes分期,组织学分级,淋巴结的转移以及浸润深度均有关(P<0.05),与年龄和性别无关。(3)USP22和Nanog在结肠癌中的表达呈正相关((r=0.509,P<0.01))。结论(1)USP22和Nanog可能在结肠癌变过程以及腺癌的浸润转移中发挥着重要作用。(2)USP22和Nanog在结肠腺癌组织的表达具有明显相关性。(3)联合检测USP22和Nanog基因对结肠癌的恶性生物学行为判断可能有重要意义。