龙葵提取物澳洲茄碱对肺癌细胞的抑制作用研究

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龙葵分布广泛,是药食两用植物。他营养成分高,可食用;也有较好的药用价值,是一种常用于治疗肿瘤的中药;龙葵还具有分布广泛、炮制工艺简单、价格便宜、使用方便等优点。龙葵全草均可入药,其生物活性成分主要包括甾体类生物碱、多糖、维生素A和维生素C等;其中,甾体类生物碱中澳洲茄碱(Solasonine)和澳洲茄边碱(Solamargine)是龙葵的主要活性成分,它们水解后苷元是澳洲茄胺(Solasodine),具有抗肿瘤活性,因此龙葵被列为十大抗肿瘤中草药之一,是一种具有良好药用前景的治疗肿瘤天然药物。人肺腺癌细胞A549和小鼠Lewis肺癌细胞(Lewis Lung Carcinomas,llc)作为肺癌的细胞模型在肺毒理学的体外研究和抗癌作用的研究中得到广泛使用,已成为抗肺癌研究的重点领域之一。本研究采用MTT法检测了龙葵提取物澳洲茄碱对人类肺癌细胞株A549及小鼠lewis肺癌细胞株LLC的抑制效果;以稍高半致死剂量的澳洲茄碱分别处理两种肺癌细胞,并进行了细胞形态学观察;以稍高半致死剂量的澳洲茄碱处理A549细胞,并进行了AnnexinV/PI双染流式细胞分析和荧光定量PCR分析p53通路的下游因子Puma基因的表达;最后,采用MTT法比较了澳洲茄碱与其水解苷元澳洲茄胺(solasodine)之间在相同的实验条件下,抑制相同的两种肺癌细胞的药效作用。结果表明,澳洲茄碱对A549和LLC肺癌细胞均有明显的抑制作用,澳洲茄碱对两种肺癌的抑制作用基本上呈现与浓度成正比的趋势,并得出澳洲茄碱对A549和LLC的24小时IC50值分别为约18和20μg/mL;细胞形态学观察表明以终浓度为20μg/mL澳洲茄碱处理的A549细胞大多呈现细胞膜皱缩样的垂死形态;annexinV/PI流式细胞分析结果表明以20μg/mL澳洲茄碱处理24小时的细胞的总死亡率为42.43%((Q2+Q3)/(Q2+Q3+Q4)),其中,早期凋亡细胞占总死亡细胞约22.08%(Q3/(Q2+Q3)),晚期凋亡或晚期凋亡和坏死细胞约占77.92%(Q2/(Q2+Q3));SYBR绿色荧光定量PCR数据显示,澳洲茄碱的处理显著提高了A549癌细胞中p53通路的下游因子Puma基因的表达水平;澳洲茄胺对A549和LLC肺癌细胞均有明显的抑制作用,其抑制作用基本上呈现与浓度成正比的趋势,并得出澳洲茄胺对A549和LLC的24小时IC50值均约为7.5μg/mL。研究表明,澳洲茄碱能明显抑制肺癌细胞的生长,其方式主要是诱发细胞凋亡或细胞凋亡和细胞坏死,并且与p53通路中Puma表达水平大幅提高密切相关;澳洲茄碱水解导致苷元释放这一结构的改变提高了其抑制肿瘤细胞的药效效率,说明苷元部分是澳洲茄胺和澳洲茄碱抑制肺癌细胞生长的有效分子基团。
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