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胰蛋白酶(EC3.4.21.4)是第一个被发现并命名的丝氨酸蛋白酶,在动物体内主要由胰腺分泌,胰蛋白酶裂解碱性氨基酸Arg或Lys羧基侧链肽,是一种肽链内切酶。人的胰腺可分泌三种类型的胰蛋白酶原,其中研究最为广泛的是人阳离子型胰蛋白酶原和阴离子型胰蛋白酶原。本论文成功地在大肠杆菌中表达了人阳离子型胰蛋白酶原(human cationic trypsinogen, HTg1)以及其突变体(mHTg1),通过复性与激活得到了重组人阳离子型胰蛋白酶(rHT1)及其突变体(mHT1),并对其进行了纯化与性质方面的研究。HTg1在大肠杆菌BL21(DE3)中可获得高效表达,但表达产物为包涵体,通过灰度扫描计算其表达量达15～20%。本研究对重组HTg1表达菌株成功进行了10L规模的发酵,菌体湿重达72g/L。活性rHT1粗酶液经过CM-FF阳离子交换层析纯化后,电泳纯度达到95%以上。对rHT1进行性质研究表明,其最适温度范围为40～45℃,最适pH范围为8.0～9.5；pH稳定性方面,在pH2～6范围内,rHT1稳定性最强,在pH7～11范围内也较为稳定,但在pH12时其易失活。在0～37℃范围内,rHT1相对稳定,纯酶液在37℃下温浴2h可保持95%以上的活性,随着温度的升高,稳定性下降,在70℃下温浴2h其基本完全失活。某些金属离子如Cu2+、Ni2+、Co2+、Zn2+等在偏碱性环境中对rHT1的活性具有明显的抑制作用,而在偏酸性环境下,抑制作用不明显,另外研究表明Ca2+可增强其稳定性；通过在设定条件下测定,以BAEE为底物,rHT1的Km为0.013mmol/L,Vmax为3300μmol/min,最大紫外吸收波长为278nm。以rHT1配制的细胞消化液应用于细胞消化,消化作用明显,经消化后的细胞转瓶培养后,细胞生长状态良好。通过构建突变体,比较了突变体和野生型之间稳定性的差异,确定了一对二硫键Cys139-Cys206对rHT1稳定性方面的重要作用,基于SWISS-MODEL同源建模,在分子构象上分析了该对二硫键对其稳定性的作用。同时推测重组人阴离子型胰蛋白酶(rHT2)的稳定性远远低于rHT1是由于该对二硫键的缺失。