仁用杏资源的SSR遗传多样性评价

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仁用杏为我国北方特有的经济果树,种质资源丰富,但因研究力度不足,其遗传背景和亲缘关系尚不明。本研究从分子水平上对我国主要栽培种植的仁用杏资源进行SSR分析,研究仁用杏品种、类型之间的亲缘关系,以期为仁用杏遗传育种和核心种质保存提供科学依据。本研究结合正交试验和单因素分析,确定了仁用杏SSR-PCR最佳体系:20μL反应体系中,Mg2+ 1.5 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U、引物0.25μmol/ L。选择与仁用杏近缘的物种(桃、杏)中开发的22对SSR引物,用两份DNA样本进行筛选,除3对引物外,其余的19对引物均能扩增出清晰的谱带。19对引物PCR产物经2 %琼脂糖凝胶电泳检测,由于目的谱带间分子量大小差别小,不能进行分辨;进一步采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,可清晰地显示出不同样本间谱带的差异。故可采用SSR扩增产物的聚丙烯酰胺电泳谱带分析揭示仁用杏SSR遗传多样性。对非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳条件优化的结果如下:胶浓度为6 %(丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺质量比29:1),27次循环的PCR产物上样量1~2μL/孔,1 000 V电泳2 h。进一步基于SSR-PAGE分析要求(目的条带明亮),舍去了主带模糊或无多态性的7对引物。12对多态性SSR引物在25份仁用杏和3份鲜食杏中共扩增到101条多态性的谱带,即101个等位基因,平均每个位点8.417个;采用Popgene软件进行多样性指数分析,多态信息含量为0.4546~0.8645,12个位点中的11个位点PIC都大于0.5,说明所选的标记具有丰富的多态性,能够在分子水平上准确反映各品种或类型间的遗传关系;不同位点的期望杂合度和观察杂合度的差值为0.0318~0.3884,差异较小,进一步说明所选的微卫星标记是合理的,用这些标记可以较准确地分析仁用杏的遗传结构。12对引物基本可以将供试的25份仁用杏和3份食用杏个体区分开。采用NTSYS pc 2.11的UPGMA法对SSR结果进行SAHN聚类分析,Tree Plot聚类分析树状图表明:3份食用杏相似性较高,与大部分仁用杏距离较远;优一与其形态上相近的类型相似系数高,龙王帽与其优选株系聚在一起;一窝蜂的3个优选株系间存在较大差异,其中国仁在多个基因座具有独特的基因型;围选一号与80B05,优一与2号的基因型没有呈现出差异。其结果与传统形态分类不完全一致,进一步的品种或类型分析和鉴定有待深入。
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