牛初乳抗轮状病毒的实验研究

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研究背景及目的轮状病毒(Rotavirus,RV)是球形立体、光滑、无包膜的双链RNA(dsRNA)病毒,属于呼肠孤病毒科、轮状病毒属,根据VP6分为A-G组,其中A组主要引起婴幼儿严重腹泻,B、C组主要导致成人腹泻,D-G组主要感染各种动物。A组轮状病毒是引起感染性腹泻的重要病原体之一,占儿童肠道感染病因的50%以上。临床上主要采取口服补液及抗病毒治疗,目前尚无有效的抗轮状病毒药物。牛初乳具有促进生长发育、增强抵抗力、调节肠道菌群等作用。本研究主要探讨牛初乳体内抗轮状病毒的作用。方法牛初乳抗A组轮状病毒的实验研究:5日龄ICR乳鼠随机分为6组,每组12只。感染轮状病毒24h后,治疗组分别给予相应浓度的牛初乳和利巴韦林连续进行治疗7天。记录每天乳鼠体重变化及腹泻情况,同时收集乳鼠粪便并检测粪便中病毒滴度及使用试纸条金标法检测粪便中轮状病毒抗原。于感染后3天、7天取乳鼠血清及小肠组织。流式细胞仪检测乳鼠血清中IL-6、IL-10、IL-12p70、TNF、IFN-γ和MCP-1的表达水平;分别取1DPI、3DPI、7DPI乳鼠小肠组织,检测其中的病毒载量;HE染色观察小肠组织形态学改变及测定空肠绒毛长度的改变;免疫组化观察乳鼠小肠中轮状病毒抗原的分布。结果和结论牛初乳高剂量组和联合治疗组与模型组相比可以增加腹泻乳鼠的体重、减轻腹泻情况;联合治疗组明显降低粪便中RV毒力;在急性感染期牛初乳高剂量组降低乳鼠血清中IL-6、IL-10和IFN-γ的表达,减轻炎症反应,在恢复期牛初乳高剂量组和联合治疗组IL-10、IFN-γ恢复至正常对照组水平(P>0.05);实时荧光定量PCR结果表明,在感染初期病毒载量无明显变化,在急性感染期及恢复期,治疗组可以抑制小肠组织中病毒复制,其中在急性感染期抑制效果较明显;HE及免疫组化结果表明牛初乳可以抑制小肠组织中轮状病毒抗原的表达,改善小肠绒毛的空泡样、充血、水肿及炎性细胞的浸润等病理损伤。
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