PEDV可诱发猪产生急性、高传染性肠道疾病—猪流行性腹泻（PED）。2010年中国境内大量爆发PED,此时PEDV出现了变异,导致之前疫苗免疫失败。S蛋白是PEDV粒子表面的一种突刺蛋白,在入侵猪的肠细胞中,有着十分重要作用,研究者们发现,S蛋白能够诱导感染的宿主产生保护性的中和抗体,来对抗PEDV。研究者们对多种PEDV毒株的基因序列进行的对比,发现它们的s基因存在明显的不同,在S蛋白的N-端,氨基酸序列1到496这之间存在一个高变区,被命名为S10A。鉴定PEDV S10A区的B细胞表位（Epitope mapping）并对其进行保守性分析,有助于从表位水平上解析PEDV变异株的免疫逃逸机制,也为制作表位疫苗提供依据。本研究利生物合成肽法,以实验室保留的抗PEDV S蛋白兔血清为一抗,利用western blot鉴定PEDV S蛋白高变区的线性B细胞表位。主要研究内如如下:1.PEDV S10A区B细胞表位预测以PEDV CV777疫苗株S蛋白为研究对象,综合考虑其S10A区所包含氨基酸的亲水性指数、柔性指数、蛋白质表面可及性和抗原性指数等参数利用DNAStar软件中的Protean模块进行分析预测;结合Phyre2在线工具模拟的空间结构,在S10A区预测出4个线性B细胞表位:94EPFDPSG100、107KATNGN112、125PDNKTLG131和373VDTYKST379。找出通用抗体的精确靶点,为迫切需要的表位疫苗提供设计方向。2.PEDV阳性猪血清抗体的筛选为了获得可以用于PEDV S蛋白上线性B细胞表位筛选的阳性猪血清,将前期构建的分别携带经密码子优化的PEDV CV777疫苗株S基因3个片段的重组表达载体p ET-32a-CF1、p ET-32a-CF2和p ET-28a-CF3转化E.coli BL21感受态细胞,采用IPTG诱导3段重组蛋白的表达;以实验室保存的20多个猪抗PEDV血清作为一抗利用western blot筛选可以和3段重组S蛋白均反应的阳性猪血清。结果表明,6#猪血清与三段重组蛋白均有阳性反应,为抗体可及性验证提供重要依据。3.PEDV S10A最小细胞表位基序鉴定将S10A区阳性反应的16肽,合成9个互相重叠7个残基的8肽编码DNA序列,将Bam H I酶切位点添加到5’端前的和TAA-Sal I酶切位点添加到3’端末;用回收的p XXGST-3载体连接合成8肽,得到p XXGST-3-CV777（38-62）重组8肽表达载体。在实验中构建了100多个8肽载体,为以后PEDV S10A最小细胞表位基序鉴定打下了基础。4.PEDV S蛋白上两个B细胞线性表位的鉴定本实验以兔抗PEDV（CF1）、兔抗PEDV（CF3）为一抗,HRP抗兔为二抗,western blot筛选出两个B细胞线性抗原表位,63CGTGIETDSGV73、1368PRLQPYEAFEK1378,为以后制作表位疫苗提供依据。