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研究目的肺癌是威胁居民生命和健康的头号杀手,非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)占其组织学分型的绝大多数(75%-80%),并且大部分患者(80%)确诊时已属晚期,无手术机会,化学治疗成为其主要治疗方法。顺铂(Cisplatin,DDP)是目前临床上最常用的化疗药物,它主要作用于肿瘤细胞DNA,抑制DNA的复制和转录,达到抗肿瘤目的。目前以DDP为基础的联合化疗仍是国际公认的晚期NSCLC的标准一线化疗方案。然而,绝大多数患者在DDP用药过程中会逐渐产生耐药现象,导致肿瘤的复发以及治疗的失败。其耐药机制至今仍未明确,这成为困扰当前肺癌治疗的一大难题。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)是一种多功能核蛋白酶,其在DNA损伤修复中发挥的关键作用使其成为近年来抗肿瘤研究的热点之一。PARP-1的活性被抑制后,DNA单链损伤(single strand break,SSBs)不能得到及时修复,从而不断累积,并转化成持续的DNA双链损伤(double strand break,DSBs),最终导致细胞死亡。PJ34是新型的PARP-1竞争性抑制剂,据相关文献报道对多种肿瘤具有显著的增殖抑制作用。因此本研究探讨PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响,期望能为临床上DDP耐药NSCLC患者的治疗提供一定的指导意义。研究方法1.体外培养人肺腺癌细胞株A549及其顺铂耐药株A549/DDP,使用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(tetrazolium-based eolorimetric assay,MTT)法分别检测不同浓度梯度的DDP、PJ34单药及无毒浓度的PJ34联合DDP对A549/DDP细胞增殖及耐药性的影响。2.流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分别检测IC50浓度的DDP、无毒浓度的PJ34单药及二者联合用药对A549/DDP细胞凋亡的影响。3.Western Blot法分别检测A549及A549/DDP细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平,并比较IC50浓度的DDP、无毒浓度的PJ34单药及二者联合用药对A549/DDP细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平的影响。研究结果1.耐药株A549/DDP对DDP的耐药性明显高于A549细胞,耐药倍数为10.5倍。2.PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的增殖抑制作用,呈浓度依赖性;无毒剂量的PJ34(3 mg?L-1)可显著增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,部分逆转耐药性,将DDP的IC50值由26.14±0.62 mg?L-1降低为11.46±0.92 mg?L-1,逆转倍数(RF)为2.28倍。3.流式细胞术检测细胞凋亡显示:3 mg?L-1(无毒剂量)的PJ34联合12 mg?L-1(IC50浓度)的DDP作用于A549/DDP细胞48h后,可显著诱导细胞凋亡,凋亡率为33.2%,较DDP单药组(17.74%)明显升高。4.Western Blot检测蛋白表达显示:与A549细胞株相比,A549/DDP耐药株内PARP-1蛋白及MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显升高;与DDP、PJ34单药组相比,PJ34联合DDP可明显降低A549/DDP细胞内PARP-1及LRP、GST-π蛋白的表达水平。研究结论1.PARP-1抑制剂PJ34对人肺腺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的生长有明显的抑制作用,呈浓度依赖性。2.无细胞毒剂量的PJ34可显著增强人肺腺癌顺铂耐药细胞A549/DDP对DDP的敏感性,促进细胞凋亡,部分逆转耐药性。3.无毒剂量的PJ34对A549/DDP细胞的耐药性逆转机制可能与细胞内PARP-1蛋白及耐药相关蛋白(LRP、GST-?)表达水平的下降有关。