鸡FADS2基因3’UTR区多态性检测及其与经济性状关联性分析

来源 :河南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ghw0531
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Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(FADS2)是生成ω-3系和ω-6系多不饱和脂肪酸的限速酶,属于脂肪酸脱氢酶基因(FADS)家族成员。多不饱和脂肪酸决定细胞膜的流动性,能够促进动物生长发育,提高动物的产仔率和成活率,提高肉质风味,调节脂类代谢等。对于禽类,多不饱和脂肪酸含量是影响鸡肉风味的重要物质,通过克隆鸡的FADS2基因,我们发现禽类FADS2基因包含13个外显子,而人类为12个外显子,与哺乳动物的最大区别就是在其3’UTR区,在第12与13外显子中间插入一个内含子,而3’UTR区与mRNA的稳定性和mRNA的降解速率有很大的联系。有关鸡FADS2基因3’UTR区遗传变异的研究目前尚未见报道。因此,本研究在前期工作的基础上,首次对鸡FADS2基因3’UTR区的遗传变异进行了分析。首先选取固始鸡安卡鸡F2代资源群72只鸡的血样,构建混合DNA池,通过测序的方法,对鸡的FADS2基因3’UTR区变异位点进行筛选;同时通过生物信息学分析,发现FADS2基因3’UTR区存在一个微卫星变异。在此基础上,应用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术,对849只鸡FADS2基因3’UTR区的5个SNP位点A240G、G322C、G840A、T1167C和T192C以及微卫星位点进行群体遗传学分析,并用SPSS16.0分析这6个变异位点对鸡经济性状的影响。主要研究结果如下:(1)应用固始鸡安卡鸡F2代资源群构建DNA池,通过测序,发现3’UTR区存在25个多态位点。通过在GeneBank上搜索最新的鸡的3’UTR序列,通过软件DNAMAN对所查询的片段进行比对分析,发现在所克隆的鸡的3’UTR之后存在一个微卫星重复。(2)以鸡的3’UTR测序结果为基础,应用PCR-RFLP技术首次检测5个SNP位点A240G、G322C、G840A、T1167C和T192C,测序结果表明5个SNP位点分别为A/G突变、G/C突变、G/A突变、T/C突变和T/C突变。5个位点都有2个等位基因,3种基因型。遗传变异分析发现,A240G位点G是优势等位基因(0.68),优势基因型为AG型(0.56),多态信息含量(PIC)、杂合度(He)、有效等位基因数(Ne)分别为0.34、0.44、1.77,属中度多态。G322C位点C是优势等位基因(0.68),优势基因型为GC型(0.56), PIC、He、Ne分别为0.34、0.43、1.76,属中度多态。T840A位点A为优势等位基因(0.68),优势基因型为AA型(0.46),PIC、He、Ne分别为0.34、0.44、1.77,属中度多态。T1167C位点C为优势等位基因(0.58),优势基因型为TC型(0.63),PIC、He、Ne分别为0.37、0.49、1.95,属中度多态。T192C位点C为优势等位基因(0.66),优势基因型为TC型(0.51),PIC、He、Ne分别为0.35、0.49、1.81,属中度多态。(3)应用PCR-SSCP技术首次检测通过分析所得的微卫星,测序结果表明此微卫星有2个等位基因,2种基因型。遗传变异分析发现,微卫星变异位点A为(0.96),优势基因型为AA型(0.91),PIC、He、Ne分别为0.08、0.08、1.09,属低度多态。(4)把检测到的5个SNP位点以及微卫星与经济性状相关的数据进行关联分析。结果表明,G322C与经济性状表现差异不显著,A240G位点突变与肝脏重、γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、C14:0、C17:0和C22:3显著相关,T840A位点突变与肝脏重和腿肌剪切力显著相关,T1167位点突变与屠体重、心脏重、肝脏重和胸肌剪切力显著相关,T192C位点突变与心脏重、脾脏重、腿肌剪切力、胸肌剪切力、低密度脂蛋白和C20:1显著相关。微卫星位点与屠体性状中的心脏重和胸肌重显著相关,呈现出AA型>AB型的规律,表明AA型个体为优势基因型,此位点对鸡的肉质性状、血清生化指标及肌肉脂肪酸含量没有显著的效应。基于以上结果,可得出如下结论:(1)对鸡的3’UTR进行测序和生物信息学分析,发现了25个SNP位点和一个微卫星位点,说明鸡FADS2基因3’UTR区域遗传变异丰富,可能对基因表达以及转录后调控乃至表型产生较大的影响。(2)5个SNP位点中的A240G、T840A、T1167和T192C4个位点与鸡的若干经济性状显著相关,它们可以通过改变mRNA的稳定性和降解速率从而影响转录前和转录后调控,进而影响基因的表达以及相应的表型。这些多态位点可望作为分子标记用于育种中的辅助选择。
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