茶多糖抗氧化及抑制蛋白质非酶糖基化的研究

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目的:研究茶多糖抗氧化及对蛋白质非酶糖基化反应的干预作用。方法:从绿茶中提取出水溶性的茶多糖活性成分,分别用不同终浓度的乙醇醇沉得到四种成分,分别命名为TPSⅠ、TPSⅡ、TPSⅢ和TPSⅣ。用H2O2/Fe2+体系法和邻苯三酚自氧化体系法对这四种茶多糖进行抗氧化活性研究,考察它们对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力,抗坏血酸和氨基葡萄糖作为阳性对照组。样品组和阳性对照组分别分为5个浓度梯度对氧化反应体系进行干预。紫外分光光度计检测干预程度,计算清除率。在无菌操作条件下,向培养瓶中加入样品,体外模拟蛋白质非酶糖基化反应体系,氨基胍作为阳性对照组,四种茶多糖样品和阳性对照组分为两个浓度梯度(0.05mg/mL,0.2mg/mL)对糖基化反应进行干预。每一样品组和阳性对照组分为5组:加样干预组(O.05mg/mL,0.2mg/mL)、完全糖基化对照组a、不加样不含糖的对照组b、加样不含蛋白的对照组c(0.05mg/mL,0.2 mg/mL)、加样不含糖的对照组d(0.05mg/mL,0.2mg/mL)。将所有培养瓶放于36.8-37.0℃的恒温培养箱中连续培养30天,分别于第0、4、8、12、18、24、30天进行NBT还原实验、二羰基化合物测定实验、非酶糖基化终产物(AGEs)生成测定实验,从糖基化反应的三个不同阶段分别测定四种茶多糖对蛋白质非酶糖基化反应的干预作用。紫外分光光度计、荧光分光光度计检测干预程度,计算抑制率。结果:四种茶多糖均有对羟基自由基和超氧阴离子的清除能力,且呈剂量依赖关系。TPSⅢ组清除OH·和O2-·能力最强,在加入其浓度分别为1.0mg/mL、5mg/mL时清除率分别为36.46%、89.16%,且高于同浓度下阳性对照氨基葡萄糖的抑制率(P<0.05),低于同浓度下Vc的抑制率(P<0.05),尤其对O2-·显示了很强的清除能力,提示茶多糖有良好的抗氧化活性。各茶多糖可以从糖基化反应的三个阶段来抑制AGEs的生成,且表现出很强的抑制作用,尤其对AGEs的生成抑制作用最显著,且呈剂量依赖关系,在浓度为200μg/mL时,TPSⅢ组抑制率可达61.27%,明显强于阳性对照氨基胍组(P<0.05)。结论:茶多糖可通过对羟基自由基和超氧阴离子的清除,表现出良好的抗氧化活性;茶多糖对蛋白质非酶糖基化有明显的抑制作用。表明茶多糖可能为抑制糖尿病并发症的活性物质之一。针对糖尿病并发症的发病机制,茶多糖有可能成为廉价、无毒副作用的糖尿病并发症的防治药物。茶多糖的抗氧化及抗糖基化功能与氨基葡萄糖的含量及多糖的分子量有关。
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