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【目的】
采用LC-MS/MS技术分析缺血性脑卒中患者和健康者血浆多不饱和脂肪酸及其经细胞色素P450(cytochromeP450,CYP)代谢产物的含量差异,探讨血浆代谢物与缺血性脑卒中发生的联系,为缺血性脑卒中标志物的研究提供参考。
【方法】
本实验纳入缺血性脑卒中病例组90例,健康对照组90例,收集所有研究对象清晨空腹静脉血后离心分离出血浆,使用固相萃取法提取得到脂肪酸,加入7种同位素内标,使用LC-MS/MS技术分析21种脂肪酸代谢物。运用SPSS17.0软件分析对比各组血浆代谢物差异,P<0.05代表有统计学意义。同时,利用Simca-P13.0软件建立正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型,计算变量投影重要性指标(VIP)值,结合ROC曲线筛选出潜在的生物标志物。
【结果】
1.病例组血浆中的花生四烯酸(AA)含量显著高于对照组,具有统计学意义(P<0.001);
2.血浆内源性代谢物二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、14,15-二羟基二十碳三烯酸(14,15-DHET)、11,12-二羟基二十碳三烯酸(11,12-DHET)、5,6-二羟基二十碳三烯酸(5,6-DHET)、5,6-二羟基二十碳三烯酸-内酯(5,6-DHET-lactone)的含量水平变化与缺血性卒中相关,其中EPA和11,12-DHET在缺血性脑卒中患者体内表现为上调,其余4种均表现为下调,在统计学上有差异(P<0.05);
3.TOAST亚型分析发现心源性栓塞(CE)组血浆代谢物14,15-DHET、11,12-DHET和19-羟基二十碳四烯酸(19-HETE)均表现为明显上调(P<0.05);
4.血浆代谢物在前、后循环组和轻、中型脑卒中组及小、中、大梗塞灶组中相比,均不具有统计学差异(P>0.05);
5.吸烟组的AA含量水平(4.03±0.32)比戒烟组(3.69±0.51)高,且吸烟组5,6-DHET含量水平(1.85±0.40)较未吸烟组(1.70±0.41)高,均有统计学意义(P<0.05);
6.Logistics回归分析结果显示GLU、LDL-C、AA、EPA为IS的危险因素,HDL-C、5,6-DHET-lactone、DHA为IS的保护性因素。
7.多元统计分析中,运用OPLS-DA进行模型预测(R2Y=0.855,Q2X=0.849),其中血浆中AA的VIP值为2.03981,5,6-DHET-lactone的VIP值为1.10026;
8.AA的ROC曲线AUC值为0.935,其最佳诊断缺血性脑卒中的阈值是3.7348,敏感性和特异性分别为92.8%和94.3%。
9.AA和5,6-DHET-lactone进行二元logistics回归分析后绘制ROC曲线,其AUC值为0.976。
【结论】血浆中AA的含量上升可能提示缺血性脑卒中的发生,可能是缺血性脑卒中的潜在生物标志物,且多不饱和脂肪酸及其经CYP450代谢物含量变化可能与缺血性脑卒中发生相关。
采用LC-MS/MS技术分析缺血性脑卒中患者和健康者血浆多不饱和脂肪酸及其经细胞色素P450(cytochromeP450,CYP)代谢产物的含量差异,探讨血浆代谢物与缺血性脑卒中发生的联系,为缺血性脑卒中标志物的研究提供参考。
【方法】
本实验纳入缺血性脑卒中病例组90例,健康对照组90例,收集所有研究对象清晨空腹静脉血后离心分离出血浆,使用固相萃取法提取得到脂肪酸,加入7种同位素内标,使用LC-MS/MS技术分析21种脂肪酸代谢物。运用SPSS17.0软件分析对比各组血浆代谢物差异,P<0.05代表有统计学意义。同时,利用Simca-P13.0软件建立正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型,计算变量投影重要性指标(VIP)值,结合ROC曲线筛选出潜在的生物标志物。
【结果】
1.病例组血浆中的花生四烯酸(AA)含量显著高于对照组,具有统计学意义(P<0.001);
2.血浆内源性代谢物二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、14,15-二羟基二十碳三烯酸(14,15-DHET)、11,12-二羟基二十碳三烯酸(11,12-DHET)、5,6-二羟基二十碳三烯酸(5,6-DHET)、5,6-二羟基二十碳三烯酸-内酯(5,6-DHET-lactone)的含量水平变化与缺血性卒中相关,其中EPA和11,12-DHET在缺血性脑卒中患者体内表现为上调,其余4种均表现为下调,在统计学上有差异(P<0.05);
3.TOAST亚型分析发现心源性栓塞(CE)组血浆代谢物14,15-DHET、11,12-DHET和19-羟基二十碳四烯酸(19-HETE)均表现为明显上调(P<0.05);
4.血浆代谢物在前、后循环组和轻、中型脑卒中组及小、中、大梗塞灶组中相比,均不具有统计学差异(P>0.05);
5.吸烟组的AA含量水平(4.03±0.32)比戒烟组(3.69±0.51)高,且吸烟组5,6-DHET含量水平(1.85±0.40)较未吸烟组(1.70±0.41)高,均有统计学意义(P<0.05);
6.Logistics回归分析结果显示GLU、LDL-C、AA、EPA为IS的危险因素,HDL-C、5,6-DHET-lactone、DHA为IS的保护性因素。
7.多元统计分析中,运用OPLS-DA进行模型预测(R2Y=0.855,Q2X=0.849),其中血浆中AA的VIP值为2.03981,5,6-DHET-lactone的VIP值为1.10026;
8.AA的ROC曲线AUC值为0.935,其最佳诊断缺血性脑卒中的阈值是3.7348,敏感性和特异性分别为92.8%和94.3%。
9.AA和5,6-DHET-lactone进行二元logistics回归分析后绘制ROC曲线,其AUC值为0.976。
【结论】血浆中AA的含量上升可能提示缺血性脑卒中的发生,可能是缺血性脑卒中的潜在生物标志物,且多不饱和脂肪酸及其经CYP450代谢物含量变化可能与缺血性脑卒中发生相关。