【摘 要】
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该研究对常用的DD-PCR和cDNA微矩阵方法进行了改进,使之能方便地应用.同时采用差异表达分析了p53对U251细胞基因表达的影响.采用限制性内切酶消化cDNA和通用质粒载体pBS,然后
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该研究对常用的DD-PCR和cDNA微矩阵方法进行了改进,使之能方便地应用.同时采用差异表达分析了p53对U251细胞基因表达的影响.采用限制性内切酶消化cDNA和通用质粒载体pBS,然后将消化的cDNA和质粒进行重组连接,以质粒载体上的序列设计通用引物进行PCR扩增,进行基因表达的差异分析.利用已知基因序列制作基因点阵是进行大规模基因差异分析的有效办法.但这需要大量的经费投入,使用价格昂贵,同时有可能丢失部分序列.利用cDNA文库点阵,可以克服上述缺陷.该研究将cDNA文库克隆DNA点在硝酸纤维素膜上,将不同处理的细胞cDNA用同位素标记后分别杂交两张相同的点阵膜,比较同位素杂交信号在两张膜间的变化,获得基因表达的差异.利用上述改进的基因表达差异分析方法,对血清饥饿和p53基因对细胞基因表达的影响进行了研究.
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