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异源三聚体G蛋白,是一类具有GTP水解酶活性的蛋白,由α、β和γ三个亚基组成,在信号转导途径中具有重要的分子开关作用。Gαq/11是异源三聚体G蛋白Gα家族成员中的一员,广泛存在于生物体内。到目前为止,研究最清楚的是关于Gαq/11在Gαq/11/PLCs信号通路中的介导作用,但是对于Gαq/11介导癌细胞信号通路中的研究并不多。深入研究Gαq/11在介导癌细胞信号通路中的功能,需要大量相关的抗体,为此我们进行了Gαq/11多克隆抗体的制备。根据Gαq/11的空间结构和亲水值,我们选择了Gαq/11(1-35AA和104-168AA)两段肽段为抗原。构建重组表达载体,转化至Rosetta TM(DE3)大肠杆菌中表达抗原并纯化,考马斯亮蓝法证明我们成功获得目的融合蛋白。用新西兰大白兔做免疫实验,得到Anti-Gαq/11抗血清。利用亲和层析方法纯化Gαq/11抗体,通过蛋白免疫印迹和酶联免疫吸附法,证明了我们成功制备出特异性良好,效价为128000的Gαq/11多克隆抗体。将Gαq/11多克隆抗体应用于免疫沉淀和免疫共沉淀实验,我们发现该抗体能识别天然状态的Gαq/11蛋白,银染实验显示Gαq/11蛋白共沉淀下来部分与Gαq/11存在相互作用的蛋白。将Gαq/11多克隆抗体应用于蛋白质组学研究,我们运用质谱实验,筛选出一系列与Gαq/11相互作用的蛋白。用聚类分析方法,我们对获得的蛋白质组学数据进行分析和分类,为了初步探讨Gαq/11在癌细胞信号通路中的功能,我们选取CD44作为下一步的研究对象。首先,我们通过免疫沉淀、GST-pull down以及免疫荧光染色实验,证明了Gαq/11与CD44存在相互作用和共定位的关系。接下来,为了进一步探讨Gαq/11在HA/CD44信号通路中的作用,通过进行Transwell实验,我们在HepG2细胞中观察Gαq/11对HA诱导细胞迁移能力的影响。在HepG2细胞中加入HA刺激,我们发现细胞的迁移能力显著提高,但是,这种效果在封闭CD44的条件下被消除。此外,在沉默了Gαq/11的HepG2细胞中,我们发现无论是否加入HA刺激,沉默了Gαq/11的细胞迁移能力显著降低,即使在封闭了CD44的条件下,也得到相类似的结果,表明了Gαq/11介导HA/CD44信号诱导的HepG2细胞迁移。综上所述,本研究为研究Gαq/11生物学功能提供了一个很好的科研工具,利用该工具初步研究了Gαq/11的新功能,即发现Gαq/11参与HA/CD44信号通路,并进一步影响细胞迁移功能,这对将来深入研究Gαq/11介导癌细胞信号通路和疾病机制具有一定的提示性意义。