1目的通过临床研究观察新风胶囊（XFC）对类风湿关节炎（RA）患者关节及全身症状积分值、健康评估指数量化标准、疾病活动度评分、炎症免疫指标、炎症极化标志物的影响,探讨XFC治疗RA的作用机制;通过实验研究观察佐剂关节炎（AA）大鼠足趾肿胀度、关节炎指数（AI）、AA大鼠关节病理形态、炎症因子、CD86、CD206、Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路等变化及其XFC对其影响,从Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴调控巨噬细胞炎症极化的角度探索新风胶囊改善RA炎症免疫的干预机制。2方法2.1临床研究本研究利用SQL Server管理工具收集2020年06月至2021年06月安徽中医药大学第一附属医院RA住院患者。观察组予以新风胶囊（一天3次,1次3粒）治疗,对照组予以甲氨蝶呤（一周1次,1次4片）治疗,余基础治疗两组进行平行匹配。观察两组患者治疗前后临床疗效观察;关节症状积分值、全身症状体征积分值、健康评估指数量化标准、疾病活动度评分;类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（anti-CCP）、血沉（ESR）、超敏-C反应蛋白（hs-CRP）、免疫球蛋白G（Ig G）、免疫球蛋白M（Ig M）、补体C3（C3）、补体C4（C4）、CD86、CD206的变化。2.2实验研究将SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组、新风胶囊组和Notch1抑制剂组,每组各6只。除正常组外,向其余四组大鼠每只右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂（0.1 m L/只）以致炎,构建成佐剂关节炎大鼠模型。第19天开始给药,新风胶囊组:制成新风胶囊混悬液（0.034g/ml）,大鼠按1 ml/100g灌胃,每天1次,剂量相当于临床用量的10倍;甲氨蝶呤组:制成甲氨蝶呤混悬液（0.095mg/ml）,按1 ml/100g灌胃,每周1次;Notch1抑制剂组:制成0.224mg/ml混合液,0.056mg/0.25ml/100g尾静脉注射,隔日1次;正常对照组及模型对照组:生理盐水1ml/100g灌胃,每天1次。各组连续用药30天。观察各组大鼠足趾肿胀度、关节炎指数;光镜观察滑膜形态学变化;酶联免疫吸附法测定（ELISA）血清细胞因子白介素-1β（IL-1β）、IL-4、IL-10、IL-13、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的变化;流式细胞术检测炎症极化标志物CD86、CD206细胞的表达;免疫组化、免疫印记法检测Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路蛋白表达的变化。3结果3.1临床研究结果3.1.1新风胶囊治疗RA的临床疗效两组总有效率相比无显著差异（P＞0.05）。3.1.2 RA患者炎症极化标志物与关节症状积分值的相关性分析RA患者CD86与关节肿胀、关节压痛、晨僵呈正相关（P＜0.01或P＜0.05）;CD206与关节肿胀、晨僵呈负相关（P＜0.01）。3.1.3 RA患者炎症极化标志物与全身症状积分值的相关性分析RA患者CD86与食后腹胀、大便稀溏呈正相关（P＜0.01）;CD206与食后腹胀、大便稀溏呈负相关（P＜0.01）。3.1.4 RA患者炎症极化标志物与HAQ、DAS-28的相关性分析RA患者CD86与HAQ呈正相关（P＜0.05）;CD206与DAS-28呈负相关（P＜0.01）。3.1.5 RA患者炎症极化标志物与炎症免疫指标的相关性分析RA患者CD86与RF、ESR、C3、C4呈正相关（P＜0.01或P＜0.05）;CD206与RF、ESR、hs-CRP、C3、C4呈负相关（P＜0.01或P＜0.05）。3.1.6两组RA患者治疗前后RF、anti-CCP变化情况在治疗后两组患者的RF、anti-CCP均显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）;与对照组相比,观察组RF、anti-CCP差异无统计学意义（P＞0.05）。3.1.7两组RA患者治疗前后ESR、hs-CRP变化情况治疗后两组患者的ESR、hs-CRP均显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）;与对照组相比,观察组改善hs-CRP效果更明显（P＜0.01）。3.1.8两组RA患者治疗前后Ig G、Ig M、C3、C4变化情况在治疗后两组患者的Ig G、C3、C4均显著降低,观察组Ig M显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）;与对照组相比,观察组改善C3效果更明显（P＜0.01）。3.1.9两组RA患者治疗前后炎症极化标志物变化情况在经过治疗后,两组患者CD86均显著降低,CD206均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;与对照组相比,观察组改善CD86、CD206效果更加明显（P＜0.01）。3.1.10两组RA患者治疗前后关节及全身临床症状积分变化情况在经过治疗后,两组患者关节疼痛、关节肿胀、关节压痛、晨僵等关节症状较治疗前明显好转（P＜0.01）,两组患者少气懒言、倦怠乏力、食欲减退、大便稀溏、关节重着等全身症状较治疗前明显好转（P＜0.01或P＜0.05）,观察组食后腹胀较治疗前明显好转（P＜0.01）,而观察组食后腹胀治疗后未见明显好转（P＞0.05）;与对照组比较,观察组关节压痛、少气懒言、倦怠乏力、食后腹胀改善程度更明显（P＜0.05）。3.2实验研究结果3.2.1 AA大鼠外周血炎症极化标志物CD86、CD206与血清细胞因子的相关性分析相关性分析显示,CD86与IL-1β、TNF-α呈正相关（P＜0.01）,CD86与IL-13呈负相关（P＜0.05）;CD206与IL-1β呈负相关（P＜0.01）,CD206与IL-4、IL-10、IL-13呈正相关（P＜0.01或P＜0.05）。3.2.2 AA大鼠外周血炎症极化标志物CD86、CD206细胞与关节滑膜组织中Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路蛋白表达的相关性分析相关性分析显示,CD86与Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1呈正相关（P＜0.01或P＜0.05）;CD206与Hes1呈负相关（P＜0.05）。3.2.3 AA大鼠足趾肿胀度的变化及XFC对其影响给药前1天,与正常组比较,模型组、新风胶囊组、甲氨蝶呤组、Notch1通路抑制剂组足趾肿胀度均显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,新风胶囊组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组足趾肿胀度均无统计学意义（P＞0.05）。给药治疗30天后,与正常组比较,模型组大鼠足趾肿胀度显著升高（P＜0.01）;与模型组大鼠比较,新风胶囊组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度均明显降低（P＜0.01）;与新风胶囊组比较,甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠足趾肿胀度均无统计学意义（P＞0.05）。3.2.4 AA大鼠关节炎指数的变化及XFC对其影响给药前1天,与正常组比较,模型组、新风胶囊组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组关节炎指数均显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,新风胶囊组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组关节炎指数均无统计学意义（P＞0.05）。给药治疗30天后,与正常组比较,模型组大鼠关节炎指数显著升高（P＜0.01）;与模型组大鼠比较,新风胶囊组、甲氨蝶呤组大鼠关节炎指数均明显降低（P＜0.05）,Notch1抑制剂组大鼠关节炎指数无统计学意义（P＞0.05）;与新风胶囊组比较,甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组大鼠关节炎指数均无统计学意义（P＞0.05）。3.2.5 AA大鼠关节病理形态学变化及XFC对其影响正常组大鼠关节结构清晰,纤维性滑膜、滑膜上皮排列整齐,无增生、突起,局部无明显炎细胞浸润;关节软骨结构完整。模型组大鼠关节表面出现滑膜组织增生,并突起至关节腔内,局部可见大量炎性细胞浸润,滑膜血管翳明显增多。新风胶囊组大鼠的关节结构较为完整,滑膜细胞排列比较整齐,关节滑膜、血管壁出现少量炎细胞浸润,关节面整体结构较为规整。甲氨蝶呤组大鼠关节面滑膜细胞排列尚整齐,关节面较模糊,部分关节软骨处可见血管翳形成。Notch1抑制剂组大鼠滑膜组织出现少量炎细胞浸润,存在滑膜组织增生伴少量血管增生,部分滑膜组织嵌入关节腔内。3.2.6 AA大鼠血清细胞因子的变化及XFC对其影响与正常组比较,模型组IL-1β、TNF-α表达升高,IL-4、IL-10、IL-13表达降低（P＜0.01）。与模型组比较,新风胶囊组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组IL-1β、TNF-α表达降低,IL-4、IL-10、IL-13表达升高（P＜0.01）。与新风胶囊组比较,甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组IL-1β、TNF-α表达均升高,IL-4、IL-10、IL-13表达均降低（P＜0.01）。3.2.7 AA大鼠外周血炎症极化标志物CD86、CD206细胞的变化及XFC对其影响与正常组比较,模型组CD86表达显著升高,CD206表达显著降低（P＜0.01）。与模型组比较,新风胶囊组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组CD86表达降低,CD206表达升高（P＜0.01）。与新风胶囊组比较,甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组CD86表达均升高,CD206表达均降低（P＜0.01）。3.2.8 AA大鼠关节滑膜组织中Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路蛋白表达情况持续给药30天后,与正常组比较,模型组Notch1、Jadded1、Hes1、RBP-Jκ蛋白表达均明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,新风胶囊组、甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组Notch1、Jadded1、Hes1、RBP-Jκ蛋白表达降低（P＜0.01）。与新风胶囊组比较,甲氨蝶呤组、Notch1抑制剂组Jadded1、Hes1、RBP-Jκ蛋白表达升高（P＜0.01）;甲氨蝶呤组Notch1蛋白表达升高（P＜0.01）,Notch1抑制剂组Notch1蛋白无统计学意义（P＞0.05）。4结论4.1 XFC治疗RA临床效果显著,可明显改善RA患者关节症状积分值、全身症状体征、HAQ、DAS-28积分值,降低RA患者RF、anti-CCP、ESR、hs-CRP、Ig G、IGM、C3、C4等实验室指标,降低CD86的表达,升高CD206的表达。说明XFC可降低RA患者CD86的表达,抑制巨噬细胞炎症极化,降低炎症免疫指标,改善RA患者体内炎症免疫反应。4.2 XFC能明显改善AA大鼠足趾肿胀度和关节炎指数,说明XFC可改善AA大鼠关节滑膜炎症反应。4.3 XFC改善AA大鼠炎症免疫指标的作用机制:4.3.1 XFC可抑制IL-1β、TNF-α的表达,同时上调IL-4、IL-10、IL-13的表达,抑制AA大鼠体内炎症反应。4.3.2 XFC可抑制CD86细胞的表达,上调CD206细胞的表达,说明XFC可调控巨噬细胞炎症极化,使巨噬细胞向M2型巨噬细胞分化,从而改善AA大鼠体内炎症反应。4.3.3 XFC可抑制Notch1、Jadded1、Hes1、RBP-Jκ的表达,说明XFC可抑制Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号通路轴,进而调控巨噬细胞炎症极化,抑制AA大鼠体内炎症反应,改善RA炎症免疫指标。