银杏叶提取物和银杏内酯对糖尿病患者血清诱导内皮细胞损伤的保护作用

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:yudsly2001
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目的:观察糖尿病患者血清(diabetic serum,DS)对内皮细胞损伤情况,以阿托伐他汀(atovastatin,AT)为阳性对照,探讨中草药银杏叶提取物(Ginkgo biloba extracts,GBE)及其成分银杏内酯(ginkgolide B,GB)对DS诱导的内皮损伤的保护作用,为糖尿病血管并发症的防治找到切实有效的药物提供一定的实验依据。方法:1.建立DS诱导的内皮细胞损伤模型。培养的人脐静脉内皮细胞株(HUVEC,ECV-304),分别暴露于10%糖尿病无并发症患者血清(DS1)、10%糖尿病有并发症患者血清(DS2)、10%健康人血清(health serum,HS)及10%生理盐水(normal sodium,NS),30min、3h、3d后,倒置显微镜观察形态学变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测3d时细胞增殖情况;各时点上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)检测评定细胞膜损伤程度、丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)检测评定脂质过氧化情况以及一氧化氮(nitric oxide,NO)检测了解内皮功能。2.筛选AT、GB以及GBE的最佳有效浓度。ECV-304细胞暴露于10%DS后(DS1组与DS2组比较各指标均无显著差异,以下实验DS均采用DS1),分别加入AT(1、5、10μmol/L)、GB(1、5、10μg/ml)、GBE(50、100、150μg/ml)孵育3d后,MTT法测定细胞增殖情况。3.不同药物对DS损伤ECV-304细胞的干预效应及评定。DS损伤模型建立后,分别给予DMSO、AT、GB以及GBE干预(根据实验2结果,AT 5μmol/L、GB10μg/ml以及GBE100μg/ml应用于药物干
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