自体骨髓间充质干细胞对同种异体骨和自体肌腱愈合的影响

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目的通过建立兔关节外腱-骨愈合模型,分别对实验标本进行组织学和生物力学的初步研究,探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)对同种异体骨和自体肌腱腱-骨愈合的影响。方法采用骨髓穿刺法获取新西兰白兔骨髓,用密度梯度离心法分离并体外培养、扩增、鉴定骨髓间充质干细胞。成年健康新西兰白兔47只,处死2只作为同种异体骨的来源,将45只新西兰白兔随机分为三组:第一组即自体肌腱和复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨的腱-骨固定组(A组)。第二组即自体肌腱和未复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨的腱-骨固定组(B组)。第三组即自体肌腱和自体骨的腱-骨固定组(C组)。模型的建立:在胫骨结节内侧建立直径约5mm的骨洞,以胫骨结节为支点取髌韧带内侧1/2翻转植入骨洞内。第一组用复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨填塞骨洞包裹肌腱,第二组用未复合骨髓间充质干细胞的同种异体骨填塞骨洞包裹肌腱。第三组用自体骨填塞骨洞包裹肌腱。术后分笼喂养,分别于术后第3、6、12周三个时间点取材进行组织学检查,每次各3只兔子。于术后第6、12周两个时间点取材进行生物力学检测,每次各3只兔子。所采集的数据用SPSS17.0统计软件进行分析,采用单因素方差分析以及SNK-q检验,检验水准a=0.05,当p﹤0.05时有统计学意义。结果组织学观察:术后3周第一组腱骨界面间成纤维细胞增生活跃和多量炎性细胞,可见胶原纤维形成。第二组:腱骨界面间成纤维细胞增生活跃和大量的炎性细胞,胶原纤维形成少。第三组:腱骨界面间成纤维细胞增生活跃和多量的炎性细胞,可见胶原纤维形成,骨母细胞增生活跃。术后6周第一组:腱骨界面间部分成纤维细胞转变为纤维细胞,可见排列较有序的胶原纤维。第二组:腱骨界面间可见纤维细胞,较少发现胶原纤维与新生骨组织结合。第三组:可见大量排列有序的胶原纤维形成并与新生骨组织结合。术后12周第一组腱骨界面间可见类似正常的纤维软骨性的腱骨连接。第二组:少量胶原纤维与骨组织融合。第三组:腱骨界面之间有sharpey纤维形成。生物力学检测结果:第6周生物力学检测结果显示:最大拔出负荷第一组和第三组明显优于第二组。第一组和第三组无显著性差异。第12周生物力学检测结果显示:最大拔出负荷三组无明显差异,无统计学意义。结论(1)在腱-骨愈合的早期复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合的组织学和生物力学明显优于未复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱的腱-骨愈合。(2)在腱-骨愈合的早期自体骨与自体肌腱腱-骨愈合的组织学和生物力学明显优于未复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱的腱-骨愈合。(3)在腱-骨愈合的早期复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合和自体骨与自体肌腱腱-骨愈合的组织学和生物力学无明显差异。(4)在腱骨愈合的后期复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合、未复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合、自体骨与自体肌腱腱-骨愈合的生物力学无明显差异。(5)在腱骨愈合的后期组织学观察从优到差依次是复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合、自体骨与自体肌腱腱-骨愈合、未复合BMSCs的同种异体骨与自体肌腱腱-骨愈合。
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