糖化温敏水凝胶的合成及其生物相容性研究

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聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAAM)具有良好的温度响应性,但其生物相容性欠缺。本研究在保持PNIPAAM温度敏感性的前提下,通过自由基聚合对PNIPAAM进行糖化修饰,糖类化合物选用葡聚糖和半乳糖,从而制得既具有温度敏感性,又具有预期的生物相容性的凝胶支架。通过控制温度的变化,实现凝胶材料对细胞层的自然脱附,避免酶解法对细胞功能的损伤。本文首先用葡聚糖对PNIPAAM进行了糖化修饰:用甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)对葡聚糖(Dextran 40000)进行化学改性,合成了葡聚糖衍生物(GMA-Dex),使GMA-Dex与NIPAAM聚合,合成了质量比r分别为0.2、0.4、0.5、0.6、0.8的P(NIPA-co-GMA-Dex)共聚水凝胶。利用红外光谱(IR)和核磁共振(~1H-NMR)表征了GMA-Dex和P(NIPA-co-GMA-Dex)的结构和组成,并研究了分别在水中和细胞培养基中的凝胶的最低临界溶解温度(LCST)、溶胀性能。结果表明,P(NIPAAM-co-GMA-Dex)凝胶在水中和细胞培养基中均具有良好的温度敏感性。P(NIPAAM-co-GMA-Dex)凝胶在培养基中的LCST低于去离子水中的LCST,退溶胀速率和再溶胀速率在培养中较去离子水中快。同时本文用半乳糖对PNIPAAM进行了糖化修饰:首先,合成出半乳糖单体GAC,然后使GAC与NIPAAM进行自由基聚合合成出P(NIPAAM-co-GAC)共聚凝胶。用红外光谱(FTIR)和核磁共振波谱(~1H-NMR)对凝胶的结构和组成进行了表征。分别对不同配比凝胶的LCST、溶胀性能进行了研究。结果表明,P(NIPAAM-co-GAC)凝胶在水中和细胞培养基中均具有良好的温度敏感性。P(NIPAAM-co-GAC)凝胶在培养基中的LCST(32.5℃)低于去离子水中的LCST(35℃),退溶胀速率和再溶胀速率在培养中较去离子水中快。将合成的水凝胶用于细胞培养研究。在葡聚糖共聚凝胶上种植成纤维细胞L929,通过光学倒置显微镜和扫描电子显微镜对细胞进行形态学观察,发现在P(NIPAAM-co-GMA-Dex)共聚凝胶上L929细胞表现出较好的生长形态;通过细胞增殖曲线和MTT法对葡聚糖共聚凝胶材料毒性的研究发现,葡聚糖的加入有助于细胞的生长,结果表明,P(NIPAAM-co-GMA-Dex)共聚凝胶相对于聚N-异丙基丙烯酰胺均聚凝胶具有更好的细胞相容性。细胞脱附研究表明,通过降低温度,可以使细胞自然脱附,保护了细胞的功能完整性,避免了使用酶解法使细胞受到的损伤。对P(NIPAAM-co-GAC)凝胶进行体外肝肿瘤细胞HepG-2的培养研究表明,半乳糖的加入有助于HepG-2细胞的生长,我们制备的半乳糖共聚凝胶具有很好的细胞相容性。随着半乳糖含量的增加,半乳糖对HepG-2细胞有生长促进作用。
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