粪肠球菌细菌素CHQS抑菌活性与作用机理的研究

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细菌素CHQS是由粪肠球菌产生的抗菌肽,前期研究发现CHQS具有IIa类N端特征序列和广谱抑菌作用,尤其对李斯特菌属表现出很强的抑菌活性,具有作为天然食品防腐剂的潜在价值。本论文研究的目的是以伊氏李斯特菌为指示菌,对CHQS的抑菌活性进行进一步的研究,阐明其抑菌机理。采用硫酸铵沉淀、阳离子交换层析和凝胶过滤层析技术从粪肠球菌培养液中提取细菌素,其浓度为291.13μg/m L,对伊氏李斯特菌的抑菌效价是20,971,520AU/m L,最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为26.74 ng/m L和107.30 ng/m L,表明其对伊氏李斯特菌有很强的抑菌活性。通过绘制时间-抑菌曲线,发现细菌素通过延长迟滞期和裂解细胞抑制细菌的生长。通过葡萄糖能量化实验,发现无葡萄糖添加的指示菌对细菌素更敏感。基于细胞膜抑菌机理的研究,发现CHQS通过增加细胞膜的通透性、破坏其完整性以及耗散质子动力势抑制细菌,此过程中胞内K~+、LDH、ATP、核酸、蛋白等物质溢出,最终导致细菌死亡。凝胶阻滞实验结果表明细菌素的目标靶点可能不涉及细菌DNA,不与细菌DNA发生结合,也不引起细菌DNA分解。经扫描和透射电镜总体观察,发现细菌素处理的指示菌细胞膜上有孔洞形成,出现胞内物质泄漏,甚至存在细胞裂解的情况。本论文研究加深了对粪肠球菌细菌素CHQS的抑菌活性的认识,阐明了其作用机理,为细菌素CHQS作为食品防腐剂的开发利用提供了理论依据。
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