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重症急性胰腺炎（Severe acute pancreatitis,SAP）是急性胰腺炎病情最严重的一种分型,其存在超过持续48小时的器官衰竭。SAP常发展成重症急性胰腺炎肺损伤（Severe acute pancreatitis associated acute lung injury,SAP-ALI）及急性胰腺炎中的急性呼吸窘迫综合征（Acute respiratory distress syndrome,ARDS）,死亡率在30%-40%之间。补液及抗感染等对症支持疗法仍然是目前主要的治疗方法。而缺乏特异性治疗是SAP-ALI患者死亡率高的主要原因。因此,有必要进一步研究SAPALI发生和发展中的机制。秋水仙碱（Colchicine,COL）是一种通过抑制微管形成及微管蛋白聚合发挥作用的免疫调节药物,广泛用于各种风湿性疾病（如痛风和白塞病）。近年研究发现秋水仙碱具有抑制选择素的表达,白细胞的迁移、胞吐和吞噬作用。此外,秋水仙碱可减少白介素释放来发挥抗炎作用。基于目前有关SAP-ALI的具体发病机制及病情进展尚不明确,急需开展基础研究为SAP-ALI的治疗提供理论依据。我们尝试构建SAP-ALI大鼠模型,探究秋水仙碱的预先干预对SAP-ALI大鼠的作用。第一部分:秋水仙碱对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤严重程度的影响目的:观察秋水仙碱对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤严重程度的影响。方法:为观察秋水仙碱对SAP-ALI大鼠的影响,选用45只SD雄性大鼠,随机分成3组（每组15只）,分别为:（1）假手术组（Sham group）;（2）重症急性胰腺炎肺损伤组（SAP-ALI group）;（3）秋水仙碱用药组（Colchicine group）。秋水仙碱用药组大鼠给予秋水仙碱工作液（0.5mg/kg/d）灌胃,假手术组及重症急性胰腺炎肺损伤组采用秋水仙碱干预组同等体积的生理盐水灌胃。利用逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠法诱导构建SAP-ALI大鼠模型。于术后24小时处死SD大鼠。观察记录术后24小时大鼠的情况,通过对胰腺及肺组织的H＆E染色,血浆淀粉酶、脂肪酶、乳酸脱氢酶含量测定,胰腺及肺组织的病理学评分统计确定造模是否成功以及探究秋水仙碱对大鼠SAP-ALI模型的干预作用。结果:术后24小时SAP-ALI组大鼠较秋水仙碱用药组大鼠表现精神萎靡、肌张力降低、呼吸深且急促。SAP-ALI组大鼠较秋水仙碱用药组大鼠的胰腺组织坏死、水肿程度重,肺组织出血明显。H＆E染色结果显示SAP-ALI组大鼠胰腺及肺组织中的细胞坏死、炎症细胞浸润、出血均较秋水仙碱用药组明显,病理学评分均高于秋水仙碱干预组。统计分析结果表明SAP-ALI组大鼠的血浆淀粉酶、脂肪酶及乳酸脱氢酶含量显著高于秋水仙碱干预组大鼠。结论:以上结果说明秋水仙碱可减轻SAP-ALI大鼠的严重程度。降低胰腺及肺组织的水肿、出血程度,减少胰腺组织的坏死范围,降低循环中淀粉酶、脂肪酶及乳酸脱氢酶的含量。第二部分:炎症在秋水仙碱保护大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的作用研究目的:观察秋水仙碱对SAP-ALI大鼠胰腺及肺组织炎症变化的影响。方法:秋水仙碱给药及造模方法同第一部分。于术后24小时处死SD大鼠。通过免疫组织荧光检测胰腺及肺组织炎性细胞标志物表达。免疫组织化学检测胰腺及肺组织中的炎性通路的激活。Western Blot检测胰腺组织中iNOS、MPO、pNF-κB p65、NF-κB、p-STAT3、STAT3、p-AKT及AKT蛋白表达。ELISA检测血浆中促炎性细胞因子水平。结果:与Sham组相比,SAP-ALI组大鼠胰腺及肺组织中的MPO、CD68及iNOS表达水平显著升高。秋水仙碱干预组大鼠胰腺及肺组织中的MPO、CD68及iNOS活性较未干预的SAP-ALI组大鼠表达水平明显降低。秋水仙碱干预组的炎性通路NF-κB p65、AKT、STAT3通路激活较SAP-ALI组明显降低。与SAP-ALI组相比,血浆中的炎性细胞因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平在秋水仙碱干预组均显著降低。结论:秋水仙碱可以降低SAP-ALI大鼠模型中的炎症反应,通过减少炎症细胞的浸润、抑制炎症通路的激活、降低血浆中促炎细胞因子的产生减轻SAP-ALI的严重程度。第三部分:凋亡在秋水仙碱保护大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的作用研究目的:观察秋水仙碱对SAP-ALI大鼠胰腺及肺组织凋亡的影响。方法:秋水仙碱给药及造模方法同第一部分。于术后24小时处死SD大鼠。通过免疫组织化学检测胰腺及肺组织的Cleaved caspase 3表达。TUNEL检测胰腺及肺组织中的细胞凋亡数目。Western Blot检测胰腺组织中凋亡相关蛋白Bcl2、Bax及Cleaved caspase 3蛋白表达。结果:与Sham组相比,SAP-ALI组大鼠胰腺及肺组织中的促凋亡相关蛋白Bax及Cleaved caspase 3蛋白表达水平显著升高,TUNEL显示胰腺及肺组织中的细胞凋亡数目增加。与SAP-ALI模型组相比,秋水仙碱干预组大鼠胰腺及肺组织中的抗凋亡蛋白Bcl2蛋白表达增加,促凋亡蛋白Bax及Cleaved caspase 3表达降低,凋亡细胞数目减少。结论:秋水仙碱可以减少胰腺及肺组织中的凋亡细胞数目,降低促凋亡相关蛋白表达,从而减轻SAP-ALI模型中胰腺及肺组织的损伤。第四部分:氧化应激在秋水仙碱保护大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的作用研究目的:探讨秋水仙碱通过抑制氧化应激减轻SAP-ALI大鼠模型的严重程度。方法:秋水仙碱给药及造模方法同第一部分。于术后24小时处死SD大鼠。通过免疫组织化学检测胰腺及肺组织的4-HNE、Nrf2及HO-1表达。ROS染色检测胰腺及肺组织中的活性氧。Western Blot检测胰腺组织中4-HNE、Nrf2及HO-1蛋白表达。生化检测血浆中SOD、MDA及GSH含量。结果:与Sham组相比,SAP-ALI组大鼠胰腺及肺组织中的4-HNE含量增加、Nrf2及HO-1蛋白表达水平显著降低,ROS检测显示胰腺及肺组织中的活性氧升高。与SAP-ALI模型组相比,秋水仙碱干预组大鼠胰腺及肺组织中的Nrf2/HO-1蛋白表达增加,4-HNE含量降低,活性氧产生也显著减少。秋水仙碱干预后的大鼠血浆中SOD及GSH含量升高,MDA含量下降。结论:秋水仙碱可降低SAP-ALI大鼠胰腺及肺组织中的氧化应激产物水平,减少胰腺及肺组织中的活性氧产生,促进Nrf2/HO-1通路的表达。图[16]表[2]参[56]