目的:利用近红外分子探针EGF-Cy5.5对人类乳腺癌MDA-MB-231(EGFR高表达)、MCF-7(EGFR正常表达)和MDA-MB-435S(EGFR阴性表达)的原位移植瘤裸鼠模型进行活体荧光成像，探讨近红外光学成像在特异性示踪肿瘤方面的价值。　　 方法:通过酰化作用将近红外荧光染料(Cy5.5)标记在人表皮生长因子(hEGF)上，构建近红外光学探针EGF-Cy5.5，经分离纯化后用紫外分光光度计检测EGF-Cy5.5与Cy5.5的发射/吸收光谱及光子强度；用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测探针与肿瘤细胞表皮生长因子受体(EGFR)的特异性结合能力。用流式细胞学方法检测MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-435S肿瘤细胞膜EGFR的表达水平。经尾静脉注射1nmol探针后，用近红外光学成像仪(eXplore Optix System)在不同时间点(1h，2h，3h，4h，5h，6h，24h，48h，72h，96h)对乳腺癌原位移植瘤裸鼠模型(MDA-MB-231组、MCF-7组、MDA-MB-435S组，各5只)进行活体动态成像，为判定探针与肿瘤细胞EGFR结合的特异性，先用过量的抗EGFR单克隆抗体cetuximab封闭肿瘤的EGFR(MDA-MB-231组、MCF-7组、MDA-MB-435S组，各5只)，再通过尾静脉注射探针后进行近红外荧光成像。注射探针48h后切取肿瘤进行离体荧光成像，并进行病理学及免疫组织化学检测。　　 结果:EGF-Cy5.5分子探针合成率为68%～70%；激光共聚焦显微镜显示；细胞摄取探针的能力依次为MDA-MB-231细胞>MCF-7细胞>MDA-MB-435S细胞，且MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞与探针的结合可被EGFR单克隆抗体cetuximab特异性阻断。流式细胞学检测细胞摄取探针后荧光强度百分比依次为MDA-MB-231是(69.00±2.45)%，MCF-7是(7.40±1.77)%，MDA-MB-435S是(0.11±0.08)%，EGF-Cy5.5荧光探针同MDA-MB-231细胞的亲和力是同MCF-7细胞亲和力的9.32倍(P<0.05)。流式细胞学检测结果证实:MDA-MB-231细胞中EGFR阳性表达率为41.96%，MCF-7细胞EGFR阳性表达率为9.40%，而MDA-MB-435S为0.12%。活体荧光成像中，MDA-MB-231组小鼠肿瘤区和对侧正常区平均荧光强度分别为(38220.00±3144.36)和(11980.00±1495.66)au(n=5)，肿瘤区荧光信号明显高于正常区(P<0.01)； MCF-7组小鼠肿瘤区和对侧正常区平均荧光强度分别为(18908.00±1771.00)和(8544.40±3543.37)au(n=5)，肿瘤区荧光信号明显高于正常区(P<0.05)；MDA-MB-435S小鼠肿瘤区和对侧正常区平均荧光强度分别为(11884.80±1143.68)和(9528.40±485.66)au，肿瘤区见高于正常区的荧光信号(P=0.012)； MDA-MIB-231组肿瘤区荧光强度明显高于MDA-MB-435S肿瘤荧光强度(P<0.01)。阻断实验:静脉注射EGF-Cy5.524 h后MDA-MB-231组肿瘤区平均荧光强度为(10472.00±842.18)au，MCF-7组肿瘤区平均荧光强度为(9058.00±795.00)au，明显低于未阻断组MDA-MB-231的肿瘤平均荧光强度(P<0.01)，而MDA-MB-435S肿瘤区平均荧光强度为(11460.00±896.10)au，与未阻断组MDA-MB-435S平均荧光强度无明显差别(P=0.551)。离体的MDA-MB-231和MCF-7肿瘤内可探测到明显的荧光信号，HE染色证实为低分化腺癌。免疫组化结果证实:MDA-MB-231肿瘤组织内EGFR表达为强阳性(+++)，MCF-7肿瘤组织内EGFR表达为弱阳性(+，n=5，P=0.004)，而MDA-MB-435S肿瘤组织内EGFR表达为阴性(-)。　　 结论:EGF-Cy5.5能特异性结合肿瘤细胞膜的EGFR，从而实现实时、无创、靶向性的肿瘤近红外光学成像，为研究人类乳腺癌的发生、发展及转移提供了新的思路和方法。