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本文以卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)为研究对象,采用同源克隆和RACE-PCR技术克隆了卵形鲳鲹热休克蛋白基因HSP70/HSC70和脂肪酸去饱和酶基因△6FAD/△9FAD的全长c DNA序列,并对序列结构特征进行了生物信息学分析。结果表明:卵形鲳鲹HSP70基因c DNA序列全长为2196bp,包含一个1920bp的开放阅读框(ORF)和276bp的3’非编码区(3’UTR),序列中无5’非编码区(5’UTR),共编码639个氨基酸。预测理论分子(MW)量为70k Da,理论等电点(PI)为5.42;HSC70基因c DNA全长为2298bp,ORF为1953bp,5’UTR为101bp,3’UTR为244bp,共编码650个氨基酸。预测理论MW为71k Da,理论PI为5.18;△6FAD基因c DNA全长为1908bp,ORF为1329bp,5’UTR为138bp,3’UTR为441bp,共编码442个氨基酸残基。理论MW约为52k Da,理论PI为8.88;△9FAD基因全长2496bp,ORF为1002bp,5’UTR为94bp,3’UTR为1397bp,共编码334个氨基酸。预测理论MW约38KDa,理论PI为9.13。生物信息学分析显示,卵形鲳鲹两型热休克蛋白70均属于疏水性蛋白,且氨基酸序列中都含有热休克蛋白70家族的3个标签序列(IDLGTTYS,IFDLGGGTFDVSIL,IVLVGGSTRIPKIQK)和真核生物胞质热休克蛋白70的特征基序(EEVD)。两型FAD也同属于疏水性蛋白,氨基酸序列中也均含有脂肪酸去饱和酶家族的三个保守组氨酸富集区,且三个组氨酸富集区的氨基酸序列在不同类型的FAD中略有差异。同源性分析及系统进化树构建结果显示,两型热休克蛋白70分别与罗非鱼(Oreochromis mossambicus)和尖吻鲈(Lates calcarifer)相应蛋白的亲缘关系较近,而两型FAD则分别与尖吻鲈(Lates calcarifer)和金头鲷(Sparus aurata)相应蛋白具较近的亲缘关系。采用Real-time PCR技术,以β-actin基因为内参,对自然水体中养殖的健康卵形鲳鲹各组织HSP70/HSC70和△6FAD/△9FAD基因的差异表达进行了分析。结果发现,HSP70在肌肉中的表达量最高,与其他各组织存在显著性差异(p<0.05),其次是肝脏、脾脏和皮肤,且相互间无显著性差异(p>0.05),而在肠中表达量最低;HSC70在肝脏中表达量最高,与其他各组织间差异显著(p<0.05),依次是头肾和皮肤,且两者间差异显著(p<0.05),而在脑中表达量最低;△6FAD在肝脏中表达量最高,与其他各组织间差异显著(p<0.05),依次是脑和心脏,且相互间差异显著(p<0.05),其他组织则较低,在胃和肌肉中几乎检测不到m RNA的表达;△9FAD同样在肝脏中表达量最高,与其他各组织间差异显著(p<0.05),其次是脑和肌肉,在脾脏和皮肤中表达量较低,而肠中表达量最少。同样,采用Real-time PCR技术,以β-actin基因为内参,对不同低温胁迫处理下的卵形鲳鲹肝脏中HSP70/HSC70和△6FAD/△9FAD基因的差异表达进行了比较分析。结果表明,降温过程中卵形鲳鲹HSP70表达量在28℃-13℃范围内呈起伏状变化,25℃时达到峰值,除与22℃时无显著差异外(p>0.05),与其他各温度下的表达量均差异显著(p<0.05),19℃时下降到最小值,且略低于降温前(p<0.05);HSC70表达量在28℃-13℃范围内整体随温度降低逐渐升高,13℃时达到峰值,约为降温前的11.1倍(p<0.05),但在19℃时其表达量略有下降,且降温刚开始时上升缓慢,后期则大幅度增加;△6 FAD表达量在28℃-13℃范围内随温度降低先缓慢降低后迅速升高,13℃时达到峰值,并与其他各温度下差异显著(p<0.05);△9FAD表达量在降温过程中的变化类似于HSC70,在28-13℃范围内逐渐升高,13℃时达到最大值,约为降温前的45.3倍,与其他各温度下差异显著(p<0.05),同HSC70一样,△9FAD在19℃时也出现了轻微下降的现象。不同低温下的时序表达模式分析中显示,HSP70在13℃和16℃低温下总体随时间先升高后下降,但13℃时变化更为明显,48h内达到峰值(p<0.05),并在84h后下降到最小值,且低于初始水平(p>0.05)。16℃时,36h内达到最大值,84h后下降到最小值,低于初始水平;19℃时在0-84h内无明显变化,仅在84h后下降到最小值;HSC70在13℃时呈起伏状变化,84h时达到最大值。16℃时,随时间先增加后下降,36h后达到最大值,随后下降至一个稳定的范围内。19℃下无明显变化,仅在24h内有轻微上升后便开始下降,直至低于初始值;△6 FAD基因在13℃时表现出的时序表达模式与16℃和19℃出现明显差异。13℃下随时间增加先降低后升高,最终恢复至初始水平(p>0.05),而16℃和19℃下则表现出一种反馈式的调节方式且逐渐随时间降低;△9 FAD在13℃时24h范围内达到最大值,随后下降至初始水平(p>0.05)。16℃时与13℃有些类似,在24h时范围内缓慢上升后便随时间增加而下降。19℃时,则在12h内迅速下降后便缓慢下降。