非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒感染猪类引发的一种急性传染病,对我国的养殖业造成了严重的危害。非洲猪瘟病毒所编码的蛋白质数量众多,免疫原性并不明确,这阻碍了基因工程疫苗的研发。为了得到有效的基因工程疫苗,需要对非洲猪瘟的抗原进行筛选和免疫原性鉴定。昆虫杆状病毒表达系统是现在应用非常广泛的一种真核表达系统,该系统可以对蛋白进行修饰使得其在结构和免疫原性等方面和天然蛋白高度一致。为了使得杆状病毒表达系统表达能力最大化,需要得到准确的病毒滴度以对感染复数进行优化。本实验选用终点稀释法来进行病毒滴度测定,首先将Hi Bi T标签和荧光蛋白GFP融合后克隆到载体上,构建一个全新的载体p UCDM-p10-GFP-Hi Bi T。随后将重组载体转染昆虫细胞,经过病毒扩增后进行病毒滴度的测定。记录Hi Bi T发光强度以及GFP的荧光结果,并且使用Western-blot鉴定出GFP蛋白成功表达。经分析发现了Hi Bi T标签可以替代GFP蛋白作为杆状病毒的报告基因。随后通过在不同的重组杆状病毒中验证,表明Hi Bi T标签可以用于杆状病毒病毒滴度测定。本实验随后研究非洲猪瘟病毒囊膜上的CD2v,P30以及CD2v跨膜转运区三个抗原蛋白的表达。将以上三个蛋白克隆到载体p UCDM-p10-GFP-Hi Bi T中,随后转染昆虫Sf9细胞进行重组蛋白表达。通过Western-blot鉴定以及亲和柱层析技术成功得到重组蛋白,最后注射小鼠进行免疫原性鉴定。结果表明,上述三个抗原蛋白诱导的特异性抗体水平最高分别是2.85,3.05,3.02,证明上述三种蛋白成功在杆状病毒系统中表达并具有良好的免疫原性。本研究探索了使用Hi Bi T标签测定杆状病毒病毒滴度的可行性,构建了全新的表达载体p UCDM-p10-GFP-Hi Bi T。并且筛选表达了非洲猪瘟病毒CD2v,P30以及CD2v跨膜转运区三个抗原蛋白并鉴定免疫原性。为开发安全高效的非洲猪瘟病毒亚单位疫苗做出了有益的探索。