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目的：以糖尿病肾病模型小鼠和人肾小球系膜细胞(HRMC)为实验对象,从整体和离体两个方面来观察生地-山茱萸对糖尿病肾病的治疗效果,并深入揭示其作用机制,为研发治疗糖尿病肾病新药提供实验证据。方法：1整体实验：取雄性6周龄C57BL/6J小鼠,适应性喂养1周,造模前禁食12h,分别于第一天、第四天以O.1g.kg-1的剂量按照体重以0.1ml·10g-1腹腔注射STZ,7天后测定小鼠空腹血糖,选取血糖值大于15mmol·L-1的小鼠作为糖尿病造模成功小鼠。取模型成功小鼠按血糖值随机分组,设立模型组、生地组(4g·kg-1)、山茱萸组(2g·kg-1)、生地-山茱萸分煎低剂量组(3g·kg-1)、生地-山茱萸分煎高剂量组(6g·kg-1)、生地-山茱萸合煎低剂量组(3g·kg-1)、生地-山茱萸合煎高剂量组(6g·kg-1)、二甲双胍组(0.2g·kg-1),以上小鼠均以高AGEs饲料喂养,另设正常组每组10只。各组分别灌胃上述剂量药物12周,模型组与正常组小鼠灌服同容积蒸馏水。每4周测定小鼠体重、血糖、饮食量、饮水量和尿量,收集尿液。实验结束后,小鼠摘眼球取血,离心取上清测生化指标,ELISA法检测血清胰岛素水平及血清AGEs含量,迅速取肾脏,去包膜清洗后精密电子天平称重,计算脏器指数；取一侧肾脏用10%甲醛固定,用于病理组织学检查；另一侧肾脏用于电镜检查及免疫组化分析。2体外实验：将培养的HRMC用30mmol·L-1葡萄糖刺激,在此模型基础上给予生地-山茱萸含药血清进行干预,分为空白对照组(5.5mmol·L-1)、高糖模型组(30mmol·L-1)、生地组、山茱萸组、生地-山茱萸分煎组、生地-山茱萸合煎组,孵育48h后,MTT法检测各组细胞增殖的情况,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA法检测细胞培养液上清中纤维连接蛋白(FN),Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量,RT-PCR法检测转化生长因子(TGF-β)的表达。结果：1一般体征：模型组小鼠平均体重增长变化较小,与正常组相比差异显著(P<0.01),各给药组小鼠体重呈上升趋势,但与正常组相比仍有差距,与模型组相比无统计意义。模型组小鼠摄食量、饮水量、尿量明显升高,与正常组相比差异明显(P<0.01),各给药组随着给药时间的延长,摄食量、饮水量、尿量均有明显减低,其中以生地-山茱萸合煎高剂量组较为明显。2血液及生化指标：血糖：与正常组相比,模型组小鼠血糖值明显升高,并在实验过程的第四周达到最高值,之后逐渐下降,但仍远高于正常值(P<0.01)；各给药组与模型组相比,随着给药持续时间的增加,各给药组降低血糖作用逐渐明显,在给药的8W以生地组、生地-山茱萸分煎低剂量组、生地-山茱萸合煎低剂量组降糖作用最为显著：在12W,生地组、生地-山茱萸分煎高剂量组、生地-山茱萸合煎低剂量、高剂量组表现最优。血清胰岛素：模型组小鼠血清胰岛素水平较正常组显著下降,与正常组比较差异显著(P<0.01),给药12W后,各给药组血清胰岛素有增加的趋势,以生地组、生地-山茱萸合煎高剂量组增加血清胰岛素水平较显著(P<0.01)。血清AGEs:模型组小鼠血清AGEs水平较正常组显著升高,与正常组比较差异显著(P<0.01),给药12W后,各给药组均有降低血清AGEs水平的作用,其中生地、生地-山茱萸合煎高剂量组降低血清AGEs水平最为显著(P<0.01)。3肾功能相关指标：24h尿蛋白排泄,模型组小鼠4W、8W、12W的24h尿蛋白排泄量明显增加(P<0.01),各给药组小鼠4W、8W、12W的24h尿蛋白明显减少,其中给药12W后生地-山茱萸合煎高剂量组降低24h尿蛋白排泄量最为明显。Scr、BUN:模型组小鼠Scr、BUN均显著升高(P<0.01),各药物干预组Scr、BUN则明显降低(P<0.05,P<0.01),其中生地组,生地-山茱萸合煎低剂量组、高剂量组降低Scr较为明显(P<0.01);而降BUN,生地组、生地-山茱萸合煎高剂量组最为出色(P<0.05)。肾指数：与正常组相比,模型组小鼠肾指数明显增加(P<0.01),各给药组小鼠肾指数较模型组均有不同程度下降(P<0.01)。4肾脏病理：光镜下：模型组小鼠肾小球体积相对肥大,基质增多,系膜区增宽明显,各用药组中上述病理改变均有不同程度的减轻。透射电镜下肾脏细胞病理结构变化：模型组系膜细胞增生,基质增多,基底膜明显增厚,而各药物组与模型组相比较有明显的改善,基底膜增厚程度减轻,滤过膜结构基本完整。免疫组化法检测的TGF-β水平：模型组肾小管上皮细胞胞质内有大量棕褐色物沉积,其范围较正常组明显增多,经过治疗后,各给药组肾小管内沉积物明显减少,表明TGF-β的免疫组化表达增高趋势被抑制,肾组织纤维化减轻。5细胞增殖实验：MTT比色法显示：30mmol·L-1的葡萄糖刺激48h下,可显著刺激HRMC的增殖,各给药组对高糖损伤下HRMC均有不同程度的抑制作用,且随着浓度的增加对HRMC的抑制作用增强,呈一定的量效关系。流式细胞仪检测结果显示：高糖可使HRMC的细胞周期发生改变,使得G1期减小,S期增加,给予生地-山茱萸各组后,各组G1期细胞含量均较高糖组增多,S期及G2期随之降低,生地-山茱萸抑制HRMC的增殖作用主要是通过细胞周期阻滞作用来实现的。6对HRMC分泌细胞外基质(FN、ColⅣ)及TGF-β的影响：实验结果表明生地-山茱萸能抑制高糖刺激的系膜细胞过度增殖和分泌细胞外基质(FN、ColⅣ),F调高糖刺激的TGF-β mRNA的作用。结论：本论文通过实验说明,生地-山茱萸能改善糖尿病肾病小鼠“三多一少”症状,降血糖,升高胰岛素,降低血清AGEs水平,改善肾功能,改善肾脏病理变化,抑制肾组织TGF-p的表达,从而起到防治DM肾脏病变,延缓肾小球硬化进程的作用。体外实验进一步显示,生地-山茱萸还可以抑制体外培养的人肾小球系膜细胞的增殖,使系膜细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,且呈剂量—效应关系,其可能机制是抑制细胞外基质(ECM)增生和TGF-p的表达,改善或延缓DN肾小球的硬化。