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本研究分为二部分：
第一部分、重组Canstatin蛋白抑制视网膜微血管内皮细胞迁移、增殖和成管的实验研究
目的：
观察重组血管能抑素(Canstatin)蛋白对体外培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)迁移、增殖、成管及磷酸化细胞外调节蛋白激酶(Phospho-extracelluar regulated protein kinases, pERK)、磷酸化Akt(Phospho-Akt,pAkt)表达的影响，初步探讨重组Canstatin蛋白抑制视网膜新生血管的作用机制。
方法：
1.体外培养RF/6A细胞系，实验分为2组，分别在培养基中添加重组Canstatin蛋白和等量的PBS。
2.采用Transwell小室法检测各组发生迁移的内皮细胞并计数。
3.铺Matrigel胶，行体外成管实验，观察Canstatin蛋白对内皮细胞成管的抑制作用。
4.用MTT法检测重组Canstatin蛋白对内皮细胞增殖的影响。
5.Western blotting检测重组Canstatin蛋白对血清刺激30min后RF/6A细胞pERK, pAkt蛋白表达的影响。
结果：
1.Transwell小室计数结果表明，加入重组Canstatin蛋白后，迁移的细胞数显著低于PBS组((7.75±1.50细胞/视野vs25.25±2.36细胞/视野；t=12.505,P=0.000)。
2.体外成管实验结果表明，重组Canstatin蛋白组内皮细胞成管数显著低于PBS组(18.67±7.02管数/视野vs44.67±2.52管数/视野；t=6.036,P=0.004)。
3.MTT结果表明，重组Canstatin蛋白组内皮细胞增殖较PBS组受到明显抑制(0.2869±0.0140 vs0.3349±0.0217；t=3.723, P=0.010)。
4.重组Canstatin蛋白组的pERK蛋白表达较PBS组明显减少，而两组的pAkt蛋白表达无显著差异。
结论：
重组canstatin蛋白能通过下调pERK蛋白的表达抑制RF/6A细胞的迁移和增殖，具有潜在抑制视网膜新生血管形成的作用。
第二部分、Twist基因干扰抑制视网膜微血管内皮细胞迁移和成管的实验研究
目的：
观察Twist基因干扰对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A)迁移及磷酸化Akt(pAkt)蛋白表达的影响，初步探讨Twist基因干扰抑制视网膜新生血管的作用机制。
方法：
1.体外培养RF/6A细胞系，并构建Twist干扰质粒和对照质粒。实验分为空白对照组(PBS组)、空白质粒组和Twist干扰质粒组，各组应用脂质体基因转染方法，转入相应的质粒表达载体。
2.采用Transwell小室法检测发生迁移的内皮细胞并计数。
3.铺Matrigel胶，行内皮细胞体外成管实验，观察Twist基因干扰对内皮细胞成管的抑制作用。
4.Western blotting检测Twist基因干扰对RF/6A细胞pAkt蛋白表达的影响。
结果：
1.Transwell小室计数结果表明，转染Twist干扰质粒后，迁移的细胞数显著低于对照质粒转染组及PBS组(7.75±2.76个/视野vs16±1.41个/视野vs15.25±0.957个/视野；F=23.786, P=0.000)。
2.体外成管实验结果表明，Twist干扰质粒组内皮细胞成管数显著低于空白质粒组及PBS组(2.25±0.96个/视野vs10.75±5.74个/视野vs15.75±7.43个/视野；F=7.159, P=0.014)。
3.Twist干扰质粒组的pAkt蛋白表达明显减少。
结论：
Twist基因干扰可显著抑制视网膜微血管内皮细胞的迁移，可能机制是通过抑制pAkt蛋白的表达发挥作用。