目的:据统计,90%的脑胶质瘤患者同时患有精神障碍类疾病并且接受抗精神类药物辅助治疗。然而,在以前的研究中,抗精神病药物和胶质瘤进展之间的关系仍然是不确定的。在先前的研究中,通过生物信息学分析我们发现吩噻嗪类药物可能具有促进脑胶质瘤细胞增殖的作用,因此我们设计本实验,在体内体外层面进一步探讨吩噻嗪类药物与胶质瘤细胞增殖与凋亡之间的关系,以期为胶质瘤患者的抗抑郁治疗提出一些参考。方法:实验分为三部分:第一部分:对脑胶质瘤细胞株表达谱基因芯片的生物信息学分析及药物筛选1、对本实验室的SWOZ2及其耐药细胞株SWOZ2-BCNU进行表达谱基因芯片检测,芯片型号为Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0;2、对以上两株细胞的基因芯片进行标准化、差异表达基因筛选及差异表达基因的功能聚类分析;3、在Connectivity-Map数据库中使用所选差异表达基因进行小分子化合物筛选。第二部分:三氟拉嗪对于脑胶质瘤细胞株的生物学研究1、针对脑胶质瘤细胞株SWOZ2、SWOZ2-BCNU、U87、U251、C6及PC12、PC3、SHSY-5Y、SW480等其他肿瘤细胞株进行MTT检测;2、对SWOZ2、SWOZ2-BCNU、U87及U251细胞株进行平板克隆检测及Ed U荧光染色检测,以明确三氟拉嗪对脑胶质瘤细胞株增殖的影响;3、对SWOZ2、SWOZ2-BCNU、U87及U251细胞株进行流式细胞仪检测及TUNEL染色,以明确三氟拉嗪对胶质瘤细胞株凋亡的影响。第三部分:观察三氟拉嗪对胶质瘤裸鼠皮下移植瘤的影响1、将U251细胞株混入基质胶中注入balb/c裸鼠右肩皮下,每只注入2×106个细胞。2、记录两周内裸鼠的瘤体体积曲线,并通过免疫组织化学方法及TUNEL检测,明确三氟拉嗪在体内对闹胶质瘤细胞的增殖及凋亡影响。结果:第一部分:对脑胶质瘤细胞株表达谱基因芯片的生物信息学分析及药物筛选1、使用t检验对SWOZ2与SWOZ2-BCNU细胞株的基因芯片进行差异表达基因筛选,共筛选出1181个差异表达基因,其中538个下调、643个上调。2、对该1181个差异表达基因进行功能聚类分析,结果显示p值排名前20的均为凋亡相关基因,结果提示SWOZ2-BCNU可能通过逃避凋亡来产生耐药。3、将凋亡相关的159个差异表达基因输入Connectivity-Map数据库筛选的结果显示,p值排名前20的小分子药物中,10个富集分数为正数、10个为负数,我们观察到三个吩噻嗪类药物富集分数均为正数。第二部分:三氟拉嗪对于脑胶质瘤细胞株的生物学研究1、通过MTT法检测发现1到10μM的三氟拉嗪引起5种脑胶质瘤细胞株细胞活力增强,但没有引起另外5种其他肿瘤细胞株细胞活力增强;2、使用平板克隆法及Ed U染色法检测均可观察到三氟拉嗪引起了SWOZ2及SWOZ2-BCNU细胞株增殖能力的显著提升。3、使用TUNEL及流式细胞仪检测均观察到三氟拉嗪引起了以上两种胶质瘤细胞株的凋亡减少。第三部分:观察三氟拉嗪对胶质瘤裸鼠皮下移植瘤的影响1、经过两周的观察记录,三氟拉嗪处理组的balb/c裸鼠皮下移植瘤瘤体体积明显上调(p<0.05)。2、免疫组化结果显示,三氟拉嗪处理组的balb/c裸鼠皮下移植瘤瘤体中Ki67及PCNA表达情况显著增强(p<0.01),TUNEL法检测发现三氟拉嗪处理组的balb/c裸鼠皮下移植瘤瘤体凋亡率较对照组显著下降(p<0.01)。结论:正常剂量的三氟拉嗪可以促进脑胶质瘤细胞的增殖,降低凋亡。因此,需通过实验进一步评估三氟拉嗪在脑胶质瘤患者的临床用药中的潜在危害。