论文部分内容阅读
赤藓糖醇（Erythritol）是一种天然存在的四碳糖醇,化学名1,2,3,4—丁四醇,分子式C4H10O4,分子量122.12,熔点126℃,沸点329～331℃,外观为白色粉状结晶,粉碎性好,溶于水会吸收较多能量,溶解热为-97.4J/g,使用时有一种凉爽的口感特征。 赤藓糖醇,在自然界中的分布十分广泛,海藻、磨菇类以及甜瓜、葡萄、桃等水果中均含有赤藓糖醇,由于细菌、真菌和酵母也能产生赤藓糖醇,所以赤藓糖醇也存在于果酒、啤酒、酱油等发酵食品中。赤藓糖醇是一种适度的甜味增量剂,甜度为蔗糖的60%～70%,不被突变链球菌利用,抗龋齿,不参加糖代谢和血糖变化,适宜糖尿病、肥胖病和心脑血管病人食用。具有酷似蔗糖的口味而发热量却接近零,生理耐受量高,可作为低热量功能性保健食品配料,应用前景十分广泛。 本研究旨在运用紫外诱变方法从实验室筛选到赤藓糖醇产生菌中选育优良菌株,进而采用原生质体电融合技术将同种不同株的较高产赤藓糖醇的高渗假丝酵母菌株进行融合,得到赤藓糖醇高产工程菌,并对该菌株的生长条件进行深入研究。 在菌种活化采集和筛选的同时,对赤藓糖醇的检测方法进行了比较,摸索出了一种利用特殊显色剂的薄层层析检测方法,即通过标准样品的梯度定量点样,制作出一张标准薄层板,在实验中样品只需将薄层板层析结果与标准板对照,就可以对样品中的赤藓糖醇进行初步定性、定量分析。这样极大方便了在诱变菌株中高产赤藓糖醇菌株的检出及细胞融合实验时在大量的融合菌株中目的融合子的检出。 对紫外诱变高产赤藓糖醇菌进行了正交实验,确定紫外诱变何光复活交替进行的诱变育种条件;将原生质体电融合获得的高产菌株从温度、培养时间和pH等生长条件进行了研究,最后确立高产赤藓糖醇菌株RH-UV-L4-F9培养条件为培养温度30℃,培养时间6d,初始培养基pH为5～6,葡萄糖浓度为30%,氮源为0.5%酵母膏与0.1%脲。经上述条件培养后发酵液中赤藓糖醇含量为120.6mg/ml,比出发菌株提高了3.61倍。 对在实验过程中影响原生质体形成率、再生率的各种因素以及影响电融合的各项参数进行研究。结果证明酶浓度、酶解时间、最适温度、PH值、渗透压稳定剂选择等对原生质体形成率、再生率都有很大影响,在对每一个影响因素做单因素实验基础上,确定了原生质体形成率、再生率都较高的最佳条件。同时由