【摘 要】
:
在植物转基因的这一领域内,大豆是较难转化的作物之一,这是由于大豆组织培养再生困难,可重复性差,基因型之间差异大,遗传转化体系是完全根据大豆的基因型所建立的。本试验通过大豆子叶节器官发生途径的再生系统,从福建地域生态型的10个不同大豆基因型中筛选到再生频率高的一个基因型,并对影响再生频率和农杆菌介导的遗传转化系统的主要因素进行了优化,建立了一个适于农杆菌转化的大豆子叶节高效受体系统,并在此基础上进行
论文部分内容阅读
在植物转基因的这一领域内,大豆是较难转化的作物之一,这是由于大豆组织培养再生困难,可重复性差,基因型之间差异大,遗传转化体系是完全根据大豆的基因型所建立的。本试验通过大豆子叶节器官发生途径的再生系统,从福建地域生态型的10个不同大豆基因型中筛选到再生频率高的一个基因型,并对影响再生频率和农杆菌介导的遗传转化系统的主要因素进行了优化,建立了一个适于农杆菌转化的大豆子叶节高效受体系统,并在此基础上进行了LEAFY和Hsl
基因的初步遗传转化研究。主要研究结果如下:
1.大豆基因型和基本培养基的筛选选择福建地域生态型的10个不同基因型大豆品种分别在MS和B5基本培养基中,进行出苗培养和丛芽培养,结果表明,在激素浓度相同的情况下,出苗率和再生频率在MS和B5这两种培养基之间的差异不大,但在基因型之间差异较大,特别是上杭六月泡的出苗率和再生频率均高于其它基因型,分别是达到43.5%和70%。
2.子叶节不定芽诱导分化的激素浓度的筛选
(1)本试验在子叶节不定芽诱导分化阶段设计了BA和IBA浓度梯度交互配比的方案,筛选到对于上杭六月泡这个基因型大豆BA和IBA的最适配比浓度,分别为1.4mg/L和0.2 mg/L,再生频率为78.95%。
(2)研究表明大豆生根阶段施加IBA可以显著提高生根率,生根基本培养基为1/2MS,蔗糖浓度为2%,筛选得到在IBA浓度为2 mg/L、BA浓度为0.2 mg/L时,生根率较高,为75.56%。
3.影响农杆菌遗传转化效率的因素第选
(1)由于在LEAFY和Hsl基因真核表达载体中所携带的选择标记基因皆为NPTll,本研究以Kan为选择剂。将大豆子叶节接入不同Kan浓度水平的培养基进行筛选,结果表明,Kan筛选浓度为150mg/L。
(2)本研究以不同浓度的TIMENTIN为杀菌剂,结果表明,浓度在0-300mg/L之间对大豆子叶节的生长以及不定芽的化化无较大的影响,在外植体与农杆菌共培养后,在液体培养基和固定培养基中,浓度分别为75mg/L和250mg/L的TIMENTIN浸泡30min,可完全抑制农杆菌的生长。
(3)农杆菌介导的大豆子叶节遗传转化中,用GUS瞬时表达率来衡量侵染和共培养的最适时间。研究表明侵染时间为15min,共培养时间为80h,GUS的瞬时表达率最高,为23.5%。因此,本研究以15min的侵染时间和80 h的共培养时间为最佳配比时间。
4.阳性植株PCR检测利用PCR法分别对转LEAFY和Hsl基因的转化苗进行检测,分别获得阳性的转基因植株为2株和3株,转化频率分别为0.76%和1.11%。
5.阳性植株的Southern杂交检测以LEAFY和Hsl基因片段为探针,对转基因阳性植株进行Southern杂交,结果表明转化体中均含有整合的外源基因。
其他文献
水体富营养化问题是全世界面临的环境问题之一,亟待解决。氮磷污染是造成水体富营养化的重要因素;在人们的日常生产生活中会产生大量的农林废弃物,如果不加以处置,随意丢弃农林废弃物会对环境造成一定的污染,从而影响人们的居住环境。为了使农林废弃物变废为宝,本文选择廉价易得的花生壳(PN)作为材料,研制氮磷吸附剂,以期在水污染控制领域得到应用。通过阅读文献,首先确立了生物质阴离子吸附剂的最佳改性工艺和条件,通
川中丘陵地区土地资源成碎片化,无法发展大规模的现代化农业产业园,对探索丘陵地区土地利用,农业公园发展方向提出了不一样的要求。总结国内外农业公园相关研究,对比我国平原地区农业公园、山地地区农业公园、丘陵地区农业公园的特点,提炼出川中丘陵地区农业公园的功能与特点。总结了适合这一地形条件的农业公园规划设计导则。以江油市新安镇农业公园为实践对象,根据当地的区位条件、资源条件的分析和功能目标定位,提出九大规
挥发性有机化合物是重要的大气污染物,对生态环境和人体健康均能构成严重威胁。因此,亟需严格控制VOCs的排放。针对工业源排放的VOCs,吸附法被认为是一种比较有效的处理方法,而吸附法中最核心的部分就是吸附剂。介孔分子筛具有规则的空间结构、水热稳定性好、丰富的比表面积和较窄孔径分布等优点,可望克服传统活性炭吸附剂易燃的缺点以应用于VOCs吸附,然而直接合成的介孔分子筛由于表面存在较多数量的硅羟基,呈现
目前,吸附法用于废水中重金属的去除,其特点是所需设备简单、操作方便,但以活性炭为代表的传统吸附剂存在成本高、分离回收困难等缺点。因此,寻求价廉易得、吸附效率高且易分离回收的新型生物吸附剂有着重要意义。另外,固相表面荧光分析法具有简单快速、灵敏度高、选择性好等优点,在环境分析领域已显现出广阔的应用前景。 本论文以棉纤维为原料,环氧氯丙烷为交联剂,聚乙烯亚胺(PEI)为改性剂,制备对Cr(Ⅵ)具有固
污水排放标准趋于严格,污水处理厂逐渐加强对总氮的管控。其中氨氮大部分能够达到标准,总氮不达标。主要是实际工程上反硝化阶段难以达到厌氧条件和缺乏高效反硝化功能菌使得硝态氮难以及时被处理。因此进行深度处理工艺研究,同时寻求高效的反硝化菌是解决水体总氮出水高的重要方法。本研究对从环境中筛选得到的反硝化菌进行培养条件优化、生理生化、生物分子学鉴定来加深对反硝化菌的认识,并设计出特异性引物为微生物应用提供技
河北平原地处中国北部,由于受气候条件的限制,水资源较为紧张,已成为国民经济发展的重要制约冈素。另一方面,由于人为活动的影响和不合理的开发利用,河北平原深层地下水水位逐年下降,形成了不能恢复的下降漏斗,导致咸淡水界面下移、矿化度升高、水化学类型改变、氟浓度升高等水质恶化现象,并诱发了严重的地面沉降,地下水环境日益恶化。面对如此严峻的形势,如何保证地下水的可持续利用,其首要问题在于了解地下水的特征及形
碳氢化合物选择性催化还原NOx(HC-SCR)技术是一种具有实用前景的富氧燃烧尾气NOx催化净化技术,有望成为现有的NH3-SCR的替代技术。其中,Ag/Al2O3-C2H5OH组合催化体系以其高效的NOx去除效率以及优异的抗水抗硫性能,成为最可能实际应用的催化剂-还原剂组合。但Ag/Al2O3-HC还原剂组合催化体系在取得高效的NOx去除效率的同时,产生了大量的CO副产物以及一定量未完全燃烧的碳
吸附作为自然界普遍发生一种物理—化学的微界面过程,对于污染物在环境中的迁移、转换以及降解都非常重要。因此,对自然界中吸附过程和吸附机理的研究一直为环境学者所重视。为了更深入的了解该过程,本文结合宏观吸附实验,温度循环扫描(CTS)实验、X射线精细结构(XAFS)表征技术和量子化学的DFT计算,研究了重金属Zn(II)在锐钛型TiO2—水界面上的宏观吸附行为和微观构型,从分子水平探索了(宏观吸附行为
氧化亚氮(N2O),既是一种重要的温室气体,又是破坏大气臭氧层的物质之一,由人类活动导致的N2O年排放量正以平均每年约0.25%的速率增加。人类活动所导致的过量氮负荷严重地扰乱了自然界的氮循环,产生了很多严重的环境后果,如:臭氧层破坏、水体酸化和富营养化、生物多样性损失等。 河流作为陆地生态系统向海洋/湖泊生态系统输送物质的重要通道之一,其氮素负荷量也在逐年上升。河流N2和N2O的释放是减少河流
ipt(异戊烯基转移酶)基因是细胞分裂素合成过程中的关键酶基因,其表达产物可促进细胞细胞分裂素的合成,进而调控植物的生长发育过程,延缓植物的衰老过程,有利于植物的生长.将ipt(异戊烯基转移酶)基因与P(拟南芥衰老专一启动子)相连,形成的嵌合基因P-ipt能够明显延缓植物的衰老,提高其生物产量和结籽数.本研究利用P-ipt基因对四个马铃薯普通栽培种材料进行遗传转化研究,探讨P-ipt基因对马铃薯叶