研究背景:随着社会老龄化的到来及诊断技术的提高,多发性骨髓瘤在人群中的发病率呈现增长的趋势,且发病趋向年轻化,所以多发性骨髓瘤的治疗越来越引起血液学医生的重视。多发性骨髓瘤是来源于浆细胞系的血液系统恶性肿瘤,主要表现为血液、免疫、骨骼及肾脏等方面的改变,发病多为60岁以上的老年人,传统化疗的副作用较大且缓解率低,病人耐受力较差,总生存期短。目前,临床已将去甲斑蝥素(norcantharidin NCTD)广泛应用于肝癌、食管癌等实体瘤化疗的辅助治疗,收到了喜人的效果,也吸引了许多研究工作者对其抗肿瘤机制进行深入细致的研究,并取得了相当不错的成果这些研究成果一方面为癌症治疗的临床用药提供了理论依据,另一方面也拓展了对恶性肿瘤的治疗手段,斑蝥中的有效成分是斑蝥素(can,CA),可抑制细胞蛋白质的合成,影响细胞的生长分化,但因其对泌尿系有强烈刺激作用,限制了其在临床的推广应用,NCTD是将CA去除1,2位两个甲基合成而得,具有显著的抗癌活性,其毒副作用较低,也是目前唯一具有升高白细胞作用的抗肿瘤药物,对常见实体肿瘤:肝癌、食管癌、结直肠癌、肺癌、胆囊癌、卵巢癌、黑色素瘤及血液系统肿瘤中的早幼粒细胞白血病、T淋巴细胞白血病等细胞的体内外生长均有明显的抑制作用,实验表明:NCTD能在细胞毒作用、诱导凋亡、抗粘附转移、抑制肿瘤血管生成等多个环节发挥抗癌作用。目的:研究NCTD对人多发性骨髓瘤细胞株U266的增殖及其凋亡的影响及其作用机制。以期与化疗药同时应用,达到减少并发症,提高疾病缓解率,增强病人耐受力,延长病人的平台期,提高病人的总生存期。方法:将不同剂量NCTD作用于人骨髓瘤细胞株U266,通过检测以下指标来观察NCTD对U266细胞株的影响:1.不同剂量及时段NCTD作用后台盼蓝拒染率以明确NCTD对U266细胞株的抗增殖作用,并找出实验所需NCTD的最佳剂量及最佳作用时间;2.倒置相差显微镜及光镜下分别观察NCTD作用于U266细胞前后的细胞密度、形态及结构的变化;3.流式细胞术检测NCTD作用于U266细胞前后细胞凋亡率及细胞周期来观察U266细胞株经NCTD作用后是否发生凋亡以及凋亡的初步机制。4.通过RT-PCR、免疫组化对Survivin、VEGF基因及蛋白表达进行检测,进一步探讨NCTD诱导U266细胞株凋亡的机制。结果:1.NCTD能有效地抗U266细胞株增殖,且随着药物剂量及作用时间增加抗增殖作用增强,抑制率与药物剂量和作用时间呈依赖性,在40μmol/L,作用48h时作用达到顶峰。2.NCTD能够诱导人多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡,光学显微镜下可见典型的凋亡改变:染色质边移、核皱缩、核碎裂、核分解。流式细胞术测得细胞凋亡率随时间剂量增加而增加,与对照组比较有显著性差异。3.流式细胞术检测细胞周期发现U266细胞经NCTD作用后细胞发生G2 /M期阻滞;且倒置相差显微镜下细胞显示为哑铃型改变,提示细胞被阻滞在分裂期。4.NCTD作用于U266细胞后Survivin及VEGF的mRNA、蛋白表达均下调。结论:1.NCTD能抑制U266细胞株增殖,并诱导其凋亡。细胞发生凋亡被阻滞在分裂期。2.NCTD的诱导凋亡机制可能与抑制Survivin及VEGF的表达有关。