近年来,小分子激酶抑制剂成为临床药物开发的热点之一。RIPK1作为一种丝/苏氨酸类蛋白激酶,其激酶活性在炎症和细胞死亡（凋亡和程序性坏死）等方面扮演重要的角色。动物实验已经表明,通过基因编辑或小分子抑制等手段抑制RIPK1的激酶活性,可以在炎症/自身免疫、神经退行性疾病等药效模型中发挥良好的治疗效果。因此,选择性RIPK1小分子抑制剂的开发成为诸多国际药物公司和科研机构的研究热点。Nec-1是第一个被报道的RIPK1抑制剂,但该骨架由于可优化的SAR窗口比较狭窄,目前止步于临床前。GSK、Denali、Rigel和维泰瑞隆等公司相继推出进入临床试验的选择性RIPK1抑制剂,其适应症覆盖炎症和中枢神经系统等诸多疾病领域,但目前还没有上市的RIPK1抑制剂。本论文的主要研究目的是开发一款具有全新结构骨架和成药潜力的新型RIPK1抑制剂。我们首先通过程序性坏死细胞模型对课题组的化合物库进行活性筛选,得到了具有吡啶连苯并噻唑骨架的化合物PK6,我们对PK6进行初步结构优化得到了PK68,其具有良好的抑制细胞程序性坏死的活性（HT29:22 nM,L929:14 nM）。随后,我们对PK68进行了靶点的确认和激酶选择性的研究,结果表明PK68是一个选择性很好的RIPK1抑制剂。分子对接模拟实验表明,PK68与RIPK1呈现typeⅡ的结合构象,这与绝大多数报道的RIPK1抑制剂（type Ⅲ）表现出显著区别。尽管PK68具有良好的活性,但其在肝微粒体中表现出极差的代谢稳定性。为了解决代谢问题和进一步提高活性,我们对PK68进行了系统的构效关系研究。首先,在分子对接模拟实验结果指导下,我们固定了一些具有氢键作用的关键基团,对化合物的苯并噻唑骨架进行了杂原子迁移,但活性均有不同程度的下降。然后,我们采用环合的策略,得到一系列具有吡啶并哌啶、吡啶并哌嗪、吡啶并吡咯烷结构骨架的RIPK1抑制剂。其中,吡啶并吡咯烷类化合物的活性有显著的提高（约二十倍）。在优化活性的同时,我们通过引入杂原子的方式降低化合物的clogP,提高化合物的代谢稳定性。最终,通过不同区域的优势片段的结构重组,我们得到四个活性和肝微粒体稳定性均良好的化合物（30、40、44、52）。最后,我们通过大鼠体内药代动力学筛选,确定了化合物44为候选化合物进行进一步的研究。化合物44在人源和鼠源细胞中均具有极高的抑制细胞程序性坏死的活性（HT29:6.5 nM,L929:5.9 nM）。在竞争性结合实验和激酶活性抑制实验中,44被证明与RIPK1具有很强的结合活性（Kd=8.6 nM）和激酶抑制活性（IC50=10 nM）。随后的激酶选择性实验表明,在10 μM浓度下,44在468个激酶中具有极好的选择性。体外的hERG和Ames实验表明,44没有表现出心脏毒性和致突变的风险。在五种主要肝代谢酶抑制性测试中,44也没有表现出明显抑制,表明了可能引起药物-药物相互作用的风险较低;更为关键的是,与PK68相比,44的肝微粒体稳定性有了大幅度提高。良好的体外活性和成药性结果激励我们对44进行了体内安全性、药物代谢动力学和药效学的研究。在小鼠连续14天灌胃下,即使在100 mg/kg的高剂量下,小鼠也均正常存活,并且没有发现体重下降和重要组织和器官损伤等现象,表明了 44在小鼠体内具有很好的安全性。在小鼠和大鼠的药物代谢动力学研究中,44具有较低的清除率和良好的生物利用度,展现出良好的口服成药性。最后,我们在炎症模型中验证了 44的体内药效。在SIRS模型中,在0.1 mg/kg的极低剂量下,化合物44就可以100%拯救由TNFα诱导的小鼠休克致死。我们相信44是一个极具成药潜力的临床前候选RIPK1抑制剂。下一步,我们将对44进行更多安全性和药效的研究,希望能够将44推进临床研究,造福临床患者。