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目的:本研究以慢性紧张型头痛(Chronic Tension-type Headache,CTTH)为慢性疼痛疾病载体,以临床对照试验为研究方法,观察针刺得气对临床效应的影响,同时采用转录组测序技术对针刺得气治疗CTTH的差异表达基因进行挖掘,尝试从基因层面对针刺得气治疗慢性疼痛的机制进行阐释。方法:1.临床研究采用随机对照试验,将纳入的111例CTTH受试者随机分为深刺组和浅刺组,接受8周共20次的针刺治疗。研究周期共36周,其中,基线期4周,治疗期8周,随访期24周。主要评价指标为入组16周的受试者头痛显著改善率,次要指标为受试者4周内头痛发作天数、头痛平均强度和头痛平均持续时间,以上指标从基线期到随访结束均每4周评价一次,主要观察时间点为入组16周。此外,采用哈佛大学麻省总医院制定的MASS(the MGH Acupuncture Sensation Scale)在每次治疗时对受试者得气感进行记录,探究临床效应和得气感之间的相关性。2.差异表达基因分析结合得气感记录和临床效应评价结果,分别选取深刺组中得气感最强且达到头痛显著改善标准和浅刺组中得气感最弱且未达到头痛显著改善标准的5例CTTH患者,并纳入5例性别、年龄与之匹配的健康受试者参与本部分研究。采集CTTH患者治疗前后和健康受试者空腹静脉血,提取白细胞总核糖核酸(Total Ribonucleic Acid,Total RNA),采用BGISEQ-500测序仪对样本进行基因表达谱筛选。对筛选出的显著差异表达基因进行基因本体论(Gene Ontology,GO)功能注释、京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Gene and Genomes,KEGG)通路富集分析,分析CTTH和针刺得气治疗相关的基因表达谱差异。结果:1.临床研究(1)深、浅刺组临床效应:两组人口学资料和各评价指标基线均衡,具有可比性(p>0.05)。受试者头痛显著改善率,在入组8~32周(包括主要指标观察时间点入组16周)访视中,深刺组均高于浅刺组(p<0.05);4周内头痛发作天数,在入组8~32周,深刺组均少于浅刺组(p<0.05);4周内头痛平均强度在各访视点两组差异均无统计学意义(p>0.05);4周内头痛平均持续时间,入组28周,深刺组短于浅刺组(p<0.05),其余各访视点无明显差异(p>0.05)。(2)深、浅刺组得气感评价:各性质得气感出现频次方面,深刺组胀感、深压感出现频次高于浅刺组(p<0.01),刺痛感出现频次低于浅刺组(p<0.01);得气感强度方面,深刺组MASS Index(MI)和胀感强度明显高于浅刺组(p<0.01),刺痛低于浅刺组(p<0.01),其余各性质针感无明显差异(p>0.05)。(3)得气感影响因素:对可能引起得气感差异的因素进行初筛和验证发现,得气感整体评价MI和以胀感为性质的得气感强度仅与深、浅刺分组具有显著相关性(p<0.001)。(4)得气感与临床效应相关性:在本研究主要观察时间点(入组16周),MI和胀感强度与受试者头痛显著改善情况呈正相关(p<0.05);MI和胀感强度与4周内头痛天数减少率呈正相关(p<0.05);胀感强度与4周内头痛平均强度减少率呈正相关(p<0.05);酸感强度与受试者4周内头痛平均持续时间减少率呈正相关(p<0.05),而刺痛与受试者4周头痛平均持续时间减少率呈负相关(p<0.05)。2.差异表达基因分析(1)与健康受试者相比,CTTH患者基因表达谱共存在327条差异表达基因,其中,上调59条,下调268条;通过针刺强得气治疗,CTTH疾病基因表达谱中有41条基因调控水平发生变化;经针刺弱得气治疗,CTTH疾病基因表达谱中有18条基因调控水平发生变化;针刺强、弱得气共同引起CTTH疾病相关的6条基因调控水平改变;针刺强得气特有调控CTTH疾病相关基因共35条;针刺弱得气特有调控基因12条。检索NCBI数据库及查阅文献,筛选出可能与CTTH发病机制和针刺强得气治疗均密切相关的关键基因MTPN、CNTNAP3、CNTNAP3B和CD274,且经qRT-PCR验证后结果一致。(2)GO功能注释结果提示健康受试者和CTTH患者之间差异表达基因功能主要与信号转导、趋化作用、细胞通讯、细胞黏附、细胞膜成分等相关;CTTH患者经针刺强得气治疗前后差异表达基因主要与细胞因子介导的信号通路、细胞因子引起的细胞反应和细胞因子应答相关;而针刺弱得气治疗前后差异表达基因未见明显功能富集。(3)KEGG信号通路分析提示健康受试者与CTTH之间的差异基因显著富集于13条通路,针刺强得气治疗前后的差异基因显著富集于18条通路,比对方案中共有通路有1条,即:细胞黏附分子(cell adhesion molecules,CAMs);而针刺弱得气治疗前后差异基因富集于10条通路,但未发现与CTTH疾病基因富集相同的通路。结论:1.深刺治疗CTTH的临床效应可能优于浅刺,尤其在减少头痛发作天数方面优势明显,而在减轻头痛强度、缩短头痛持续时间方面可能无明显优势。2.得气感与深、浅针刺分组可能具有相关性,本试验的深刺组操作可能更易诱导出以胀感为性质的较强得气感。3.得气感可能是影响针刺治疗CTTH临床效应的关键因素。在减少头痛天数和头痛强度方面,整体强度相对较强、以胀感为性质的得气感可能疗效更优;在缩短头痛持续时间方面,以酸感为性质的得气感可能疗效更优。4.针刺强得气可能对CTTH患者基因表达谱产生影响。MTPN、CNTNAP3、CNTNAP3B和CD274等基因的mRNA表达水平变化可能是CTTH发病的重要分子生物学机制,而针刺强得气可能通过调控上述关键基因的表达及其信号转导产生临床疗效,但仍需进一步的研究予以证实。