论文部分内容阅读
牙周治疗的最终目的是使已破坏的牙周支持组织包括牙骨质、牙周膜和牙槽骨再生形成新附着，患牙能行使正常的功能。研究发现在牙周病损部位，由于牙周膜细胞来源非常有限，以致牙周组织很难达到有效地再生和重建，组织工程技术的出现有望解决这一难题。组织工程是细胞生物学、材料学、工程学共同发展并相互结合的产物，其目的是研究和开发组织替代物。为初步探讨组织工程技术在牙周再生领域的应用潜能并为支架材料的选择提供实验依据，本研究在体外分离培养人牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament fibroblasts，PDLFs)的基础上观察其成骨细胞表型特征；将人PDLFs与三种可吸收引导组织再生(Guided tissue regeneration，GTR)膜材料体外复合培养检测其生物相容性；探索采用组织工程方法体外培养构建组织工程化牙周膜的可行性；初步探讨SD(Sprague-Dawley)大鼠PDLFs与BME-10X(?)复合物同种异体颅骨皮质骨表面引导成骨作用。本研究包括以下四个实验： 实验一：人牙周膜成纤维细胞体外培养鉴定及其成骨表型特征检测 方法：体外分离培养人PDLFs，以人胎儿皮肤成纤维细胞为对照检测细胞碱性磷酸酶表达及矿化能力。结果：体外培养人PDLFs表达高水平碱性磷酸酶(p＜0.05)，矿化诱导液连续培养30天左右可形成矿化结节。结论：体外培养PDLFs具有成骨细胞表型特征，与人胎儿皮肤成纤维细胞相比更具有分化潜能，可作为牙周组织工程种子细胞来源。 实验二：三种可吸收引导组织再生膜生物相容性实验研究 方法：将人PDLFs与三种商品化可吸收引导组织再生膜：BME-10X(?)、引导组织再生胶原膜作为牙周组织工程支架材料可行性研究BioMesh⑧及Bio一Gide⑧复合体外培养，进行形态学观察，细胞附着及增殖的测定。结果:人PDLFS可在三种可吸收膜上贴附、增殖，并复层生长。细胞在三种膜上的附着无显著性差异(P>0 .05)，在BME一1 ox⑧及Bi。一Gide⑧上生长、繁殖明显好于BioMes俨(p<0.05)。结论:引导组织再生胶原膜BME一10尹及Bio一Gide⑧具有良好的生物相容性，有望成为PDLFs的支架材料应用于牙周组织工程研究。实验三:BME一10x⑧为载体体外培养构建组织工程牙周膜 方法:用组织工程方法将人PDLFs与BME一10x⑧体外复合培养，通过倒置相差显微镜、透射电镜及组织学进行观察。结果:人PDLFs可在BME一10妒上贴附、增殖，分泌大量的细胞外基质，复层生长形成纤维组织结构，基本形成具有活性细胞及其基质的膜样组织。结论:BME一IOx⑧具有良好的生物相容性，作为PDLFS的支架材料体外培养可构建组织工程牙周膜。实验四:sD大鼠PDLFs与BME一10护复合物颅骨皮质骨表面埋植引导成骨作用实验研究 方法:体外培养sD大鼠PDLFs并与BME一10妒复合培养后，植入同种异体SD大鼠颅骨皮质骨表面。于植入3、6周进行组织学观察。结果:与对照组相比复合细胞组在材料表面与颅骨交界处可见明显的骨样组织形成，随着植入时间的延长，成骨作用明显。结论:PDLFs与BME一IOX⑧复合物在颅骨皮质骨表面具有明显的引导成骨能力。