马铃薯三种主要病毒的ELISA和RT-PCR检测技术的研究

来源 :甘肃农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:jinshi46
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马铃薯病毒病是影响马铃薯生产的重要因子。马铃薯X 病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯Y 病毒(Potato virus Y,PVY)、马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)是严重危害我国马铃薯产量的三种主要病毒。分别以感染马铃薯X 病毒、马铃薯Y 病毒和马铃薯卷叶病毒的叶片为试材,对马铃薯三种主要病毒进行了酶联免疫吸附测定(ELISA)的检测技术的研究, 从而建立了一套完整的ELISA检测PVX、PVY 和PLRV 程序。根据马铃薯X 病毒、马铃薯Y 病毒和马铃薯卷叶病毒的外壳蛋白基因序列,分别设计合成了三对寡核苷酸引物。分别从感染马铃薯X 病毒、马铃薯Y 病毒和马铃薯卷叶病毒的马铃薯叶片中提取出病毒RNA,进行cDNA 合成并运用PCR 技术进行体外扩增,得到三条长度分别约535 bp,680bp 和627bp 的特异PCR 扩增产物,与设计的外壳蛋白基因大小一致,而对照未得到任何产物。建立了快速灵敏的PVX,PVY 和PLRV 检测方法,为三种马铃薯主要病毒的检测提供了有效手段。本文报道了两种简捷、快速、灵敏、可靠的马铃薯三种主要病毒的检测技术: ELISA和RT-PCR 检测技术。ELISA可在不需提纯病毒RNA 的情况下实现对病毒的检测,较RT-PCR 检测技术快速、简捷,更适合于大量样品的检测。而二者的灵敏度基本相同,而RT-PCR 检测技术特异性更强。
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