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壳多糖是一种天然聚阳离子功能性生物多糖,具有优良的生物相容性,无免疫原性,在体内可被溶菌酶降解成为机体所需的氨基葡萄糖和N-乙酰氨基葡萄糖,它在农业、轻工业、医药、生物医用材料、环保等领域已有广泛的研究和应用。壳多糖是甲壳质脱乙酰基的产物,它含有大量的自由氨基。氨基含量的多少会影响壳多糖的理化性质,如溶解性、溶液的粘度、吸附性等,同时也会影响到以壳多糖为原料制备的膜材料在生物医用膜、生物材料领域的应用。 本文以壳多糖及其乙酰化衍生物作为组织工程用细胞培养支架材料,采用不同的方法制备了不同类型的乙酰化壳多糖膜。研究了不同类型的乙酰化壳多糖膜的吸水性、体外降解性、透光性、通透性、结晶性、对牛血清蛋白的吸附性等性质。结果表明乙酰化壳多糖膜的性质随着乙酰化程度的不同性质会有所不同,但它们都有很好的吸水性和透光性,有比较高的结晶性,在体外可被溶菌酶降解,对于小牛血清蛋白有一定的吸附性。这表明壳多糖及其乙酰化衍生物在生物医用膜材料方面具有广阔的应用前景。 角膜病是一种常见病,在临床上是致盲的一个重要因素。角膜细胞的体外培养对于角膜生物学、病理学、药理学以及角膜移植的研究具有重要的意义,也是体外构建组织工程化人工角膜的重要研究内容之一。本文对兔角膜上皮细胞和基质细胞的培养方法进行了研究,解决了传统角膜上皮细胞组织块贴壁培养时细胞迁出慢,不易形成单层的难题,建立了兔角膜上皮细胞原代培养的方法。在贴壁之前用胰蛋白酶对兔角膜上皮进行适当的消化,然后进行组织块贴壁培养。培养一周后观察角膜上皮细胞呈多角形,排列紧密,分裂旺盛,细胞状态良好,与体内角膜上皮细胞形态基本相似,是一种理想的角膜上皮细胞原代培养方法。对于兔角膜基质细胞则采用消化法培养。培养一周后,细胞生长旺盛,两周后细胞铺满整个培养板孔,呈纺锤形。传代乙酞化壳多糖膜的制备、性质及其生物相容性的研究培养两周后细胞铺满整个培养板孔,大部分细胞呈梭形。在此基础上尝试对人角膜上皮和基质细胞进行原代培养。人角膜上皮细胞在培养10天后,细胞呈多角形,排列紧密;人角膜基质细胞在培养巧天后,细胞呈纺锤形,有的部分呈复层生长。 体外重建组织工程化人工角膜是解决角膜移植材料匾乏的一条有效途径。壳多糖及其衍生物膜在神经、软骨、骨组织工程中已经得到了深入的研究和广泛的应用。本文以不同类型的乙酞化壳多糖膜为支架进行体外培养角膜上皮细胞和基质细胞实验研究。观察兔角膜上皮细胞和基质细胞在膜上的生长情况,研究不同类型壳多糖膜与角膜细胞的生物相容性。结果表明兔角膜上皮细胞在一定乙酞化程度的膜上生长良好,培养一周后观察细胞排列紧密,呈多角形,铺满整个膜面,表明该膜与兔角膜上皮细胞有很好的生物相容性;角膜基质细胞在膜上生长两周左右时,观察基质细胞在一定乙酞化程度的膜上生长良好,呈纺锤形生长,有的部分呈复层生长,表明一定乙酞化程度的膜与角膜基质细胞有很好的生物相容性,通过上述试验筛选出比较理想的角膜细胞生长的载体膜,并初步构建出功能性细胞一支架复合物,为体外构建理想的组织工程化人工角膜提供一定的基础。